Journal of microbiology, epidemiology and immunobiologyJournal of microbiology, epidemiology and immunobiologyЖурнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии0372-93112686-7613Central Research Institute for Epidemiology4710.36233/0372-9311-2016-3-37-44ORIGINAL RESEARCHESОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯIMMUNOCHEMICAL ANALYSIS OF RECOMBINANT CHIMERIC POLYPEPTIDE OspCgar+afz OF BORRELIA GARINII AND B. AFZELIIISOLATESИММУНОХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ РЕКОМБИНАНТНОГО ХИМЕРНОГО ПОЛИПЕПТИДА OspCgar+afz ИЗОЛЯТОВ BORRELIA GARINII И B.AFZELIIKaravaevVS. ..КараваевВ. С.
Russian Federation
OleinikovaE. S.ОлейниковаЕ. С.
Russian Federation
AzaevM. Sh.АзаевМ. Ш.
Russian Federation
Beklemishev'A. B.БеклемишевА. Б.
Russian Federation
Research Institute of BiochemistryНИИ биохимииState Scientific Centre of Virology and Biotechnology «Vector»ГНЦ вирусологии и биотехнологии «Вектор»28062016933374410042019Copyright ©; 2016, Karavaev V..., Oleinikova E.S., Azaev M.S., Beklemishev' A.B.Copyright ©; 2016, Караваев В.С., Олейникова Е.С., Азаев М.Ш., Беклемишев А.Б.2016Karavaev V..., Oleinikova E.S., Azaev M.S., Beklemishev' A.B.Караваев В.С., Олейникова Е.С., Азаев М.Ш., Беклемишев А.Б.https://creativecommons.org/licenses/by/4.0https://microbiol.crie.ru/jour/article/view/47

Aim. Comparative study of antigenic properties of recombinant proteins OspCgar and OspCafz and recombinant chimeric polypeptide OspCgar+afZ, that contains amino acid sequences of mature immune dominant OspC proteins of West-Siberian isolates of Borrelia garinii (OspCgar) and B. afzelii (OspCafz), and evaluation of possibility of their use as antigens during creation of test-systems for serodiagnostics of Lyme borreliosis (LB) on the territory of Western Siberia. Materials and methods. Recombinant chimeric polypeptide OspCgar+afz and recombinant mature proteins OspCgar and OspCafz, obtained by expression of the corresponding genes in Escherichia coli cells, purified by affinity chromatography in Ni-NTA-sepharose CL-6B and studied by EIA method for the ability to bind antibodies from sera of LB patients. Results. A difference in sensitivity of determination by EIA method of specific IgM and IgG against borreliae in blood sera of LB patients with localized stage of the disease during use of OspCgar, OspCafz and OspCgar+afZ chimera as antigens was shown. Chimeric antigen OspCgar+afz was established to show higher antigenic activity compared with each of the OspCgar or OspCafZ antigens separately. Conclusion. The results of the study allow to examine the recombinant chimeric polypeptide OspCgar+afz as a possible component during creation of test-systems for serodiagnostics of LB on the territory of West Siberia.

Цель. Сравнительное исследование антигенных свойств рекомбинантных белков OspCgar и OspCafz и рекомбинантного химерного полипептида OspCgar+afz содержащего аминокислотные последовательности зрелых иммунодоминантных белков OspC западносибирских изолятов Borrelia garinii (OspCgar) и B.afzelii (OspCafZ), и оценка возможности их использования в качестве антигенов при создании тест-систем для серодиагностики Лайм-боррелиоза (ЛБ) на территории Западной Сибири. Материалы и методы. Рекомбинантный химерный полипептид OspCgar+afz и рекомбинантные зрелые белки OspCgar и OspCafz, полученные экспрессией соответствующих генов в клетках Escherichia coli, очищали аффинной хроматографией на колонке с Ni-NTA сефарозой CL-6B и исследовали методом ИФА на способность связывать антитела сывороток больных ЛБ. Результаты. Показано различие в чувствительности определения методом ИФА специфических к боррелиям IgM и IgG в сыворотке крови больных ЛБ с локализованной стадией заболевания при использовании в качестве антигенов OspСgar, OspCafZ и химера OspCgar+afZ. Установлено, что химерный антиген OspCgar+afz проявлял более высокую антигенную активность, чем в отдельности каждый из антигенов OspCgar или OspCafz. Заключение. Результаты исследования позволяют рассматривать рекомбинантный химерный полипептид OspCgar+afZ как возможный компонент при создании тест-систем для серодиагностики ЛБ на территории Западной Сибири.

Borrelia burgdorferi s.lLyme borreliosisOspC recombinant proteinsBorrelia burgdorferi s.lEIA analysisserodiagnosticsЛайм-боррелиозрекомбинантные белки OspCИФА анализсеродиагностикаБеклемишев А.Б., Рябченко А.В., Караваев В.С. Патент 2514230 РФ. Рекомбинантные химерные полипептиды, несущие эпитопы различных иммунодоминантных белков спирохет комплекса Borrelia burgdorferi sensu lato, и способ диагностики иксодового клещевого боррелиоза, опубликован 03.03.2014.Караваев В.С., Рябченко А.В., Беклемишев А.Б. Иммунохимический анализ рекомбинантных белков OspC западносибирских изолятов Borrelia garinii и Borrelia afzelii. Журн. микробиол. 2010, 1: 20-23.Караваев В.С., Генина Е.С, Рябченко А.В., Беклемишев А.Б. Значимость рекомбинантных белков западносибирских изолятов Borrelia burgdorferi s.l. для серодиагностики иксодового клещевого боррелиоза. Клинич. лаб. диагн. 2014, 6: 44-48.Коренберг Э.И., Горелова Н.Б., Ковалевский Ю.В. Основные черты природной очаговости иксодовых клещевых боррелиозов в России. Паразитология. 2002, 36 (3): 177-187.Рябченко А.В., Ивлева И.Н., Беклемишев А.Б. Комплексная оценка зараженности клещей Ixodes persulcatus, распространённых в рекреационной зоне новосибирского научного центра, спирохетами Borrelia burgdorferi s.l. Журн. инфекц. патол. 2004. 1 (3-4): 107-110.Рябченко А.В., Караваев В.С., Беклемишев А.Б. Сравнительный структурный и имм> нохимический анализ рекомбинантных антигенов OspC новосибирских изолятов спирохет Borrelia garinii и В. afzelii. Бюлл. Сибирского отделения РАМН. 2010. 2: 6-' 2Фоменко Н.В., Мельникова О.В., Черноусова Н.Я., Епихина Т.И. Выявление акт:.'-! к боррелиям комплекса Borrelia burgdorferi sensu lato. Бюлл. сибирской ve:. 2008, Прил. 1: 78-84.Aguero-Rosenfeld М.Е., Wang G., Schwartz I., Wormser G.P. Diagnosis of lyme bo~:Ьоаь. Clin. Microbiol. Rev. 2005, 18 (3): 484-509.Baranova E., Solov Ev P., Panfertsev E., Baranova A., Feduykina G., Kolombet L., Morshed M.G., Biketov S. Rational design of antigens to improve the serodiagnosis of tick-borne bor-reliosis in central regions of Russia. Adv. Exp. Med. Biol. 2014, 807: 9-21.Ivanova L., Christova I., Neves V. et al. Comprehensive seroprofiling of sixteen B. burgdorferi OspC: implications for Lyme disease diagnostics design. Clin. Immunol. 2009, 132 (3): 393-400.Magnarelli L.A., Ijdo J.W., Padula S.J. et al. Serologic diagnosis of Lyme borreliosis by using enzyme-linked immunosorbent assays with recombinant antigens. J. Clin. Microbiol. 2000, 38 (5): 1735-1739.Makhani N., Morris.S.K., PageA.V.etal. Atwiston Lyme: the challenge о diagnosing European Lyme neuroborreliosis. J. Clin. Microbiol. 2011, 49: 455-457.Mathiesen M.J., Hansen K., Axelsen N. et al. Analysis of the human antibody response to outer surface protein C (OspC) of Borrelia burgdorferi sensu stricto, B. garinii, and B. afzelii. Med. Microbiol. Immunol. 1996, 85 (3): 121-129.Mavin S., Evans R., Milner R.M. et al. Local Borrelia burgdorferi sensu stricto and Borrelia afzelii strains in a single mixed antigen improves western blot sensitivity. J. Clin. Pathol. 2009, 62: 552-554.Stanek G., Reiter M. The expanding Lyme Borrelia complex-clinical significance of genomic species. Clin. Microbiol. Infect. 2011, 17 (4): 487-493.Wang I.N., Dykhuezen D.E., Qiu W. et al. Genetic diversity of OspC in local population of Borrelia burgdorferi sensu stricto. Genetics. 1999, 151 (1): 15-30.Wilske B., Jauris-Heipke S., Lobentanzer R. et al. Phenotypic analysis of outer surface protein C (OspC) of Borrelia burgdorferi sensu lato by monoclonal antibodies: relationship to genospe-ciesand OspA serotype. J. Clin. Microbiol. 1995, 33 (1): 103-109.Wilske B.V., Fingerle U., Schulte-Spechtel U. Microbiological and serological diagnosis of Lyme borreliosis. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2007, 49 (1): 13-21.