Journal of microbiology, epidemiology and immunobiologyJournal of microbiology, epidemiology and immunobiologyЖурнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии0372-93112686-7613Central Research Institute for Epidemiology30410.36233/0372-9311-2018-5-26-31ORIGINAL RESEARCHESОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯTHE PRODUCTION OF MONOCLONAL ANTIBODIES TO TETRASACCHARIDE - SYNTHETIC ANALOGUE OF THE CAPSULAR POLYSACCHARIDE OF STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE OF SEROTYPE 14 AND THEIR IMMUNOCHEMICAL CHARACTERIZATIONПОЛУЧЕНИЕ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ К ТЕТРАСАХАРИДУ - СИНТЕТИЧЕСКОМУ АНАЛОГУ КАПСУЛЬНОГО ПОЛИСАХАРИДА STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE СЕРОТИПА 14 И ИХ ИММУНОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКАYakovlevaI. V.ЯковлеваИ. В.
Russian Federation
KurbatovaE. A.КурбатоваЕ. А.
Russian Federation
AkhmatovaE. A.АхматоваЭ. А.
Russian Federation
SukhovaE. V.СуховаЕ. В.
Russian Federation
YashunskyD. V.ЯшунскийД. В.
Russian Federation
TsvetkovYu. E.ЦветковЮ. Е.
Russian Federation
NifantievN. E.НифантьевН. Э.
Russian Federation
SviridovV. V.СвиридовВ. В.
Russian Federation
Mechnikov Reseach Institute of Vaccines and SeraНИИ вакцин и сывороток им. И.И.МечниковаZelinsky Institute of Organic ChemistryИнститут биоорганической химии им. Н.Д.Зелинского28102018955263110042019Copyright ©; 2018, Yakovleva I.V., Kurbatova E.A., Akhmatova E.A., Sukhova E.V., Yashunsky D.V., Tsvetkov Y.E., Nifantiev N.E., Sviridov V.V.Copyright ©; 2018, Яковлева И.В., Курбатова Е.А., Ахматова Э.А., Сухова Е.В., Яшунский Д.В., Цветков Ю.Е., Нифантьев Н.Э., Свиридов В.В.2018Yakovleva I.V., Kurbatova E.A., Akhmatova E.A., Sukhova E.V., Yashunsky D.V., Tsvetkov Y.E., Nifantiev N.E., Sviridov V.V.Яковлева И.В., Курбатова Е.А., Ахматова Э.А., Сухова Е.В., Яшунский Д.В., Цветков Ю.Е., Нифантьев Н.Э., Свиридов В.В.https://creativecommons.org/licenses/by/4.0https://microbiol.crie.ru/jour/article/view/304

Aim. Production of monoclonal antibodies (mAb) to synthetic tetrasaccharide - repeating unit of the capsular polysaccharide (CP) of Streptococcus pneumoniae serotype 14 and their immunochemical characterization. Materials and methods. In order to generate the hybridoma producing mAb, mice were immunized with synthetic tetrasaccharide conjugated with bovine serum albumin (BSA) with following hybridization of B lymphocytes with mouse myeloma cells. Antibodies were obtained in vitro andin vivo. Immunochemical characterization of mAb to tetrasaccharide was carried out using a variety of ELISA options. Results. For the first time obtained mouse hybridoma, producing IgM to tetrasacchride. The IgM titer of anti-tetrasacharide antibodies in supernatants of clones and in the ascitic fluid of mice in ELISA detected by biotinylated tetrasaccharide and synthetic CP adsorbed on the solid phase was higher compared to the use of bacterial CP as well cover antigen. In the reaction of inhibition of the ELISA, the mAb recognized the corresponding carbohydrate epitopes of the bacterial CP of S. pneumoniae serotype 14 dissolved in the liquid phase better than tetrasaccharide ligand and synthetic CP. Conclusion. To detect mAb to tetrasaccharide in ELISA preferably to use synthetic analogues of the CP as solid phase antigens. The obtained mAb to tetrasaccharide can be used to determine the representation of the protective tetrasaccharide epitope of CP in the development of pneumococcal vaccines.

Цель. Получение моноклональных антител (МкАт) к синтетическому тетрасахариду - повторяющемуся звену капсульного полисахарида (КП) Streptococcus pneumoniae серотипа 14 и их иммунохимическая характеристика. Материалы и методы. Для получения гибридомы, продуцирующей МкАт, мышей иммунизировали синтетическим тетрасахаридом, конъюгированным с бычьим сывороточным альбумином (БСА) с последующей гибридизацией В-лимфоцитов с клетками мышиной миеломы. Антитела получали in vitro и in vivo. Иммунохимическую характеристику МкАт к тетрасахариду проводили в реакции иммунопреципитации и с помощью различных вариантов постановки ИФА. Результаты. Впервые получена мышиная гибридома, продуцирующая IgM к тетрасахариду. Титр IgM к тетрасахариду в супернатантах клонов и в асцитической жидкости мышей в ИФА, выявленных с помощью биотинилированого тетрасахарида и синтетического КП, адсорбированных на твердой фазе, был выше по сравнению с использованием твердофазного бактериального КП. В реакции ингибирования ИФА МкАт распознавали соответствующие углеводные эпитопы растворенного в жидкой фазе бактериального КП S. pneumoniae серотипа 14 лучше, чем лиганд тетрасахарида и синтетический КП. Заключение. Для выявления МкАт к тетрасахариду в ИФА в качестве твердофазных антигенов предпочительно использовать синтетические аналоги КП. Полученные МкАт к тетрасахариду могут быть использованы для определения представленности протективного тетрасахаридного эпитопа в КП при разработке пневмококковых вакцин.

Streptococcus pneumoniae серотипа 14monoclonal antibodyisotypesynthetic tetrasaccharideStreptococcus pneumoniae serotype 14capsular polysaccharideмоноклональные антителаизотипсинтетический тетрасахаридкапсульный полисахаридВанеева Н.П., Ястребова Н.Е. Специфический иммунный ответ к отдельным капсульным полисахаридам Streptococcus pneumoniae у здоровых доноров и лиц, вакцинированных пневмококковыми вакцинами. Журн. микробиол. 2015, 5: 20-26.Генинг М.Л., Курбатова Е.А., Цветков Ю.Е., Нифантьев Н.Э. Разработка подходов к созданию углеводной конъюгированной вакцины третьего поколения против Streptococcus pneumoniae: поиск оптимальных олигосахаридных лигандов. Усп. хим. 2015, 84: 1100-1113.Методические рекомендации по получению гибридом-продуцентов моноклональных антител к бактериальным антигенам. Утверждены 29.11. 85 г. МЗ СССР.Сухова Е.В., Яшунский Д.В., Цветков Ю.Е. и др. Синтез олигосахаридных фрагментов капсульного полисахарида Streptococcus pneumoniae тип 14 и их неогликоконъюгатов с бычьим сывороточным альбумином. Известия АН. Серия химическая. 2014, 2: 511-521.Харит С.М. Пневмококковые вакцины. В кн.: Вакцины и вакцинация: национальное руководство. Под ред. В.В.Зверева, Б.Ф.Семенова, Р.М.Хаитова. М., ГОЭТАР-Медиа, 2011.Akhmatova N.K., Kurbatova E.A., Akhmatov E.A. et al. The effect of a BSA conjugate of a synthetic hexasaccharide related to the fragment of capsular polysaccharide of Streptococcus pneumoniae type 14 on the activation of innate and adaptive immune responses. Front. Immunol. 2016, 7: 1-11.Ananikov V.P., Eremin D.B., Yakukhnov S.A. et al. Organic and hybrid systems: from science to practice. Mendeleev Commun. 2017, 27: 425-438.Ananikov V.P., Galkin K.I., Egorov M.P. et al. Challenges in the development of organic and hybrid molecular systems. Mendeleev Commun. 2016, 26: 365-374.Broecker F., Anish C., Seeberger P.H. Generation of monoclonal antibodies against defined oligosaccharide antigens. Methods Mol. Biol. 2015, 1331: 57-80.Jansen W.T., Snippe H. Short-chain oligosaccharide protein conjugates as experimental pneumococcal vaccines. Indian J. Med. Res. 2004, 119 (Suppl): 7-12.Kochetkov N.K., Nifant'ev N.E., Backinowsky L.V. Synthesis of the capsular polysaccharide of Streptococcus pneumoniae type14. Tetrahedron. 1987, 43 (13): 3109-3121.Kurbatova E.A., Akhmatova N.K., Akhmatova E.A. et al. Neoglycoconjugate of tetrasaccharide representing one repeating unit of the Streptococcus pneumoniae type 14 capsular polysaccharide induces the production of opsonizing IgG1 antibodies and possesses the highest protective activity as compared to hexa- and octasaccharide conjugates. Front. Immunol. 2017, 8: 1-13.Reimer K.B., Gidney M.A., Bundle D.R., Pinto B.M. Immunochemical characterization of polyclonal and monoclonal Streptococcus group A antibodies by chemically defined glycoconjugates and synthetic oligosaccharides. Carbohydr Res. 1992, 232(1): 131-142.Safari D., Dekker H.A., Joosten A.F. Identification of the smallest structure capable of evoking opsonophagocytic antibodies against S. pneumoniae type 14. Infect. Immun. 2008, 76 : 4615-4623.Song J.Y., Moseley M.A., Burton R.L., Nahm M.H. Pneumococcal vaccine and opsonic pneumococcal antibody. J. Infect. Chemother. 2013, 3: 412-425.