Journal of microbiology, epidemiology and immunobiologyJournal of microbiology, epidemiology and immunobiologyЖурнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии0372-93112686-7613Central Research Institute for Epidemiology2910.36233/0372-9311-2016-2-41-48ORIGINAL RESEARCHESОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯN-ACETYL-β-D-GLUCOSAMINIDASE OF VIBRIO CHOLERAEN-АЦЕТИЛ-β-D-ГЛЮКОЗАМИНИДАЗА ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВDuvanovaO. V.ДувановаО. В.
Russian Federation
MishankinB. N.МишанькинБ. Н.
Russian Federation
VodopianovA. S.ВодопьяновА. С.
Russian Federation
SorokinV. M.СорокинВ. М.
Russian Federation
Rostov-on-Don Research Institute for Plague ControlРостовский-на-Дону противочумный институт28042016932414810042019Copyright ©; 2016, Duvanova O.V., Mishankin B.N., Vodopianov A.S., Sorokin V.M.Copyright ©; 2016, Дуванова О.В., Мишанькин Б.Н., Водопьянов А.С., Сорокин В.М.2016Duvanova O.V., Mishankin B.N., Vodopianov A.S., Sorokin V.M.Дуванова О.В., Мишанькин Б.Н., Водопьянов А.С., Сорокин В.М.https://creativecommons.org/licenses/by/4.0https://microbiol.crie.ru/jour/article/view/29

Aim. Study N-acetyl-β-D-glucosaminidase (chitobiase) (EC 3.2.1.30) in strains of Vibrio cholerae of O1/non-O1 serogroups of various origin, that is a component of chitinolytic complex taking into account object of isolation and epidemiologic significance of strains. Materials and methods. Cultures of V.cholerae O1/non-O1 serogroup strains were obtained from the museum of live culture of Rostov RIPC. Enzymatic activity analysis was carried out in Hitachi F-2500 fluorescent spectrophotometer using FL Solutions licensed software. NCBI databases were used during enzyme characteristics. Results. N-acetyl-β-D-glucosaminidase in V.cholerae O1/non-O1 serogroup strains was detected, purified by column chromatography, studied and characterized by a number of physical-chemical and biological properties. Comparative computer analysis of amino acid sequence of N-acetyl-β-D-glucosaminidases of V.cholerae (VC2217 gene), Serratia marcescens etc. has allowed to attribute the enzyme from V.cholerae to glycosyl-hydrolases (chi-tobiases) of family 20 and classify it according to enzyme nomenclature as EC 3.2.1.30. Conclusion. N-acetyl-β-D-glucosaminidase in V.cholerae of O1/non-O1 serogroups of various origin and epidemiologic significance, participating in chitin utilization was studied and characterized for the first time, and its possible role in biology of cholera causative agent was shown.

Цель. Изучить N-ацетил-β-D-глюкозаминидазу (хитобиазу) (ЕС 3.2.1.30) у штаммов холерных вибрионов О1/неО1серогрупп различного происхождения, являющуюся составной частью хитинолитического комплекса с учетом объекта выделения и эпидемиологической значимости штаммов. Материалы и методы. Культуры штаммов Vibrio cholerae О1/неО1серогрупп получены из музея живых культур Ростовского НИПЧИ. Анализ ферментативной активности проведен на флюоресцентном спектрофотометре Hitachi F-2500 с использованием лицензионного программного обеспечения FL Solutions. При характеристике фермента привлекали базы данных NCBI. Результаты. Обнаружена, очищена колоночной хроматографией, изучена и охарактеризована по ряду физикохимических и биологических свойств N-ацетил-β-D-глюкозаминидаза у штаммов Vibrio cholerae О1/неО1серогрупп. Сравнительный компьютерный анализ аминокислотной последовательности N-ацетил-β-D-глюкозаминидаз холерного вибриона (ген VC2217), Serratia marcescens и др. позволил отнести фермент из V.cholerae к гликозилгидролазам (хитобиазам) семейства 20 и классифицировать согласно номенклатуре ферментов как КФ 3.2.1.30. Заключение. Впервые изучена и охарактеризована N-ацетил-β-D-глюкозаминидаза у холерных вибрионов О1/неО1серогрупп различного происхождения и эпидемиологической значимости, учавствующая в утилизации хитина, а также показана ее возможная роль в биологии возбудителя холеры.

Vibrio choleraeN-ацетил-β-D-глюкозаминидазная активность4-метилумбеллиферил-N-ацетил-β-D-глюкозаминид (4-MUF. GlcNAc)Vibrio choleraestrainsN-acetyl-β-D-glucosaminidase activity4-methylumbelliferone-N-acetyl-β-D-glucosaminide (4-MUF. GlcNAc)штаммыAшмарин И.П. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Л., Медицинская литература, 1962.Мишанькин Б.Н., Шиманюк Н.Я., Водопьянов С.О., Романова Л.В., Водопьянов А.С., Дуванова О.В., Атарова Г.Т., Демьяненко С.В. Изучение хитинолитического комплекса холерного вибриона сероварианта О139. Биотехнология. 2010, 1: 32-40.Bhowmick R., Ghosal A., Chatterjee N. S. Effect of environmental factors on expression and activity of chitinase genes ofvibrios with special reference to Vibrio choleraе. J. Appl. Microbiol. 2007, 103: 97-108.Henrissat B., Bairoch A. New familities in the classification of glycosyl hydrolase based on amino acid sequence similarities. Biochem. J. 1993, 293:781-788.Hunt D.E., Gevers D., Vahora N.M., Polz M.F. Conservation of the chitin utilization pathway in the Vibrionaceae. Appl. Environ. Microbiol. 2008, 74 (1): 44-51.Kaplan J.B., Ragunath C., Ramasubbu N., Fine D.H. Detachmеnt of Actinobacillus actinomycetemcomitans biofilm cells by an endogenous P-hexosaminidase activity. J. Bacteriol. 2003, 185 (16): 4693-4698.O’Brien M., Colwell R. A rapid test for chitinase activity that uses 4-methylumbelliferryl-N-acetyl-β-D-glucosaminide. Appl. Environ. Microbiol. 1987, 53 (7): 1718-1720.Tews I., Vincentelli R., Vorgias C. N-acetylglucosaminidsae (chitobiase) from Serrata marcescens: gene sequence, and protein production and purification in Escherichia coli. Gene. 1996, 170: 63-67.