Journal of microbiology, epidemiology and immunobiologyJournal of microbiology, epidemiology and immunobiologyЖурнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии0372-93112686-7613Central Research Institute for Epidemiology22210.36233/0372-9311-2017-6-3-9ArticlesСтатьиFLOW-CYTOFLUORIMETRIC ANALYSIS OF CYTOTOXICITY OF YERSINIA PESTIS STRAINSПРОТОЧНО-ЦИТОФЛУОРИМЕТРИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ЦИТОТОКСИЧНОСТИ ШТАММОВ YERSINIA PESTISSazanovaE. V.СазановаЕ. В.
Russian Federation
ShmelkovaT. P.ШмельковаТ. П.
Russian Federation
KravtsovA. L.КравцовА. Л.
Russian Federation
MalyukovaT. A.МалюковаТ. А.
Russian Federation
PopovYu. A.ПоповЮ. А.
Russian Federation
Russian Research Institute for Plague Control «Microb»Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб»281220179463910042019Copyright ©; 2017, Sazanova E.V., Shmelkova T.P., Kravtsov A.L., Malyukova T.A., Popov Y.A.Copyright ©; 2017, Сазанова Е.В., Шмелькова Т.П., Кравцов А.Л., Малюкова Т.А., Попов Ю.А.2017Sazanova E.V., Shmelkova T.P., Kravtsov A.L., Malyukova T.A., Popov Y.A.Сазанова Е.В., Шмелькова Т.П., Кравцов А.Л., Малюкова Т.А., Попов Ю.А.https://creativecommons.org/licenses/by/4.0https://microbiol.crie.ru/jour/article/view/222

Aim. Study cytotoxic effect of Yersinia pestis strains with various degree of virulence on leukocytes of whole defibrinated human blood. Materials and methods. 15 strains of Y. pestis were used in the study. DNA histograms were registered using flow cytofluorimeter. Results. Possibility of using cytotoxicity to differentiate Y. pestis into virulent and avirulent wfas experimentally proven. The data obtained was comparable with LD5o for mice and did not contradict molecular-genetic characteristics of the strains. Conclusion. The approach proposed allows to obtain reliable results and is perspective for evaluation of virulence for Y. pestis strains.

Цель. Изучение дитотоксического воздействия штаммов Yersinia pestis с различной степенью вирулентности на лейкоциты цельной дефибринированной крови человека. Материалы и методы. В работе использовано 15 штаммов Y. pestis. ДНК-гистограммы регистрировали с помощью проточного цитофлуориметра. Результаты. Экспериментально обоснована возможность использования показателя цитотоксичности для дифференциации штаммов Y. pestis на вирулентные и авирулентные. Полученные данные сопоставимы с показателем LD5o для мышей и не противоречат молекулярно-генетическим характеристикам штаммов. Заключение. Предлагаемый подход позволяет получать достоверные результаты и является перспективным для оценки вирулентности штаммов Y. pestis.

Y. pestisY pestisvirulenceapoptosisflow cytometryвирулентностьапоптозпроточная цитометрияКозинец Г.И., Высоцкий В.В., Погорелов В.М., Еровиченков А.А., Малов В.А. Кровь и инфекция. М., Триада-Фарм, 2001.Кравцов А.Л., Пилипенко Т.Ю., Коровкин С.А., Наумов А.В. Способ оценки фагоцитоза. А.с. 1522923 СССР, МКИ G 01 № 33/53. № 4014143. Изобретения. 1994, 4: 187.Лабораторная диагностика опасных инфекционных болезней. Практическое руководство. Г.Г.Онишенко, В.В. Кутырев (ред.). М., Шико, 2013.Порядок организации и проведения лабораторной диагностики чумы для лабораторий территориального, регионального и федерального уровней. Методические указания. МУК 4.2.2940-11.Пустовалов В.Л., Васильева Г.И., Киселева A.K. Устойчивость к фагоцитозу штаммов чумного микроба в зависимости от температуры культивирования. Вопросы профилактики природноочаговых инфекций. Саратов, 1983, с. 16-21.Хайдуков С.В., Зурочка А.В. Вопросы современной проточной цитометрии. Клиническое применение. Изд-во Челябинская государственная медицинская академия, Челябинск. 2008. /ШмельковаТ.П., Кравцов А.Л, ЩуковскаяТ.Н., ЛяпинМ.Н., Костюкова Т.А., Малюкова Т.А., Головко Е.М., Видяева Н.А., Коннов Н.П. Влияние биологических свойств чумного микроба на развитие апоптоза лейкоцитов крови человека в системе in vitro. Проблемы особо опасных инфекций. 2007, 1: 85-89.Шмелькова Т.П., Сазанова Е.В., Кравцов А.Л., Малюкова Т.А., Попов Ю.А., Бойко А.В. Девдариани З.Л., Щуковская Т.Н. Определение вирулентных свойств патогенных микроорганизмов in vitro: состояние вопроса. Жури, микробиол. 2016, 6: 100-110.Bashaw J., Norris S., Weeks S. et al. Development of in vitro correlate assay of immunity to infection with Yersinia pestis. Clin, And. Vaccine Immunology. 2007, 14 (5): 605-616.Bubeck S.S., Cantwell A.M., Dube P.H. Delayed inflammatory response to primary pneumonic plague occurs in both outbred and inbred mice. Infection and Immunity. 2007, 75 (2): 697-705.Kravtsov A.L., Grebenyukova T.P., Bobyleva E.V. et al. Flow cytofluorometric assay of whole blood leukocyte DNA degradation in response to Yersinia pestis and Staphylococcus aureus. Proceedings ofSPIE. 2001, 4241: 260-267.Parrino J., Hotchkiss R.S., BrayM. Preventation of immunecell apoptosis as potential therapeutic strategy for severe infections. Emerg. Infect. Dis. 2007, 13 (2): 191-198.Silva T.M. et al. Secondary necrosis in multicellular animals: an outcome of apoptosis with pathogenic implications. Apoptosis. 2008, 13: 463-482.Silva T.M. Bacteria-induced phagocyte secondary necrosis as a pathogenicity mechanism. J. Leuk. Biology. 2010, 88 (5): 885-896.Spinner J.L., Seo K.S., O’Loughlin J.L. et al. Neutrophils are resistant to Yersinia YopJ/P-induced apoptosis and are protected from ROS-mediated cell death by the type III secretion system. PLoS ONE. 2010. 5(2): e9279. Doi: 10.1371/journal.pone. 0009279.Spinner J.L., Cundiff J.A., Kobayashi S.D. Yersinia pestis type III secrenion system-dependent inhibition of human polymorphonuclear leukocyte function. Infect. Immunity. 2008, 76 (8): 3754-3760.Zhang Y, Bliska B. Role of macrophage apoptosis in the pathogenesis of Yersinia. Curr. Top. Microb. Immunol. 2005, 289: 151-174.