Journal of microbiology, epidemiology and immunobiologyJournal of microbiology, epidemiology and immunobiology0372-93112686-7613Central Research Institute for Epidemiology19610.36233/0372-9311-2017-5-32-38OBTAINING FUSED RECOMBINANT PROTEINS OprF-ΔOprI, ΔOprF-ΔOprI AND OprF-aTox-ΔOprl OF PSEUDOMONAS AERUGINOSAKaloshinA. A.noemail@neicon.ruSoldatenkovaA. V.noemail@neicon.ruZiminaE. M.noemail@neicon.ruMikhailovaN. A.noemail@neicon.ruMechnikov Research Institute of Vaccines and Sera28102017945323810042019Copyright © 2017, Kaloshin A.A., Soldatenkova A.V., Zimina E.M., Mikhailova N.A.2017Aim. Obtaining fused recombinant proteins of Pseudomonas aeruginosa that have protective properties against experimental pseudomonas infection. Materials and methods. Fused sequences of P. aeruginosa genes oprF, oprl and deleted form of toxA were cloned in plasmids for the expression in Escherichia coli. The synthesized recombinant proteins were purified in Ni-sepharose columns. Recombinant proteins were administered to mice intraperitonealiy twice with a 2 week interval to evaluate protective properties. Virulent culture of P. aeruginosa strain PA103 was injected into the animals intraperitonealiy 2 weeks after the immunization course as experimental challenge. Results. 3 fused recombinant proteins were produced: 1. OprF-ΔOprl included full sequence of OprF protein and deletion variant of OprI (lacking first 20 amino acids); 2. AOprF-AOprl consisted of C-terminal region (192 - 342 amino acids) OprF and deletion variant of Oprl protein; 3. OprF-aTox-ΔOprI included full sequence of OprF protein, sequence of nontoxic variant of exotoxin A (without 106 C-terminal amino acids) and deletion variant of Oprl protein. Fused recombinant proteins OprF-AOprl and OprF-aTox-ΔOprI at immunization doses of 25 and 50 pg for the first and second protein, respectively, were shown to have the best protective properties. Conclusion. The results obtained open perspectives for further studies to create specific immune biological preparations based on fused recombinant proteins of P. aeruginosa.Pseudomonas aeruginosaAOprF-AOprI и OprF-aTox-AOprlPseudomonas aeruginosaF protein of the outer membrane (OprF)1 protein of the outer membrane (Oprl)exotoxin Aanatoxinfused recombinant proteins OprF-AOprlAOprF-AOprl and OprF-aTox-AOprIбелок F наружной мембраны (OprF)белок I наружной мембраны (Oprl)экзотоксин Аанатоксинслитые рекомбинационные белки OprF-AOprI[Гатыпова Е.В., Злыгостев С.А., Калошин А.А., Михайлова Н.А. Получение рекомбинантного белка I наружной мембраны (Oprl) Pseudomonas aeruginosa и исследование его антигенных свойств. Журн. микробиол. 2008, 6: 50-53.][Калошин А.А., Леонова Е.И., Солдатенкова А.В. Михайлова Н.А. Исследование протективных свойств комплекса рекомбинантного белка F наружной мембраны и рекомбинантного анатоксина Pseudomonas aeruginosa. Вестник РАМН. 2016, 71 (3): 5-10.][Калошин А.А., Михайлова Н.А. Леонова Е.И. Получение гибридного белка OprF-OprI Pseudomonas aeruginosa. Журн. микробиол. 2012, 3: 35-43.][Калошин А.А., Исаков М.А., Михайлова Н.А., Вертиев Ю.В. Получение рекомбинантной атоксической формы экзотоксина A Pseudomonas aeruginosa. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2012, 154 (9): 330-335.][Калошин А.А., Гатыпова Е.В., Михайлова Н.А. Получение рекомбинантных форм белка F наружной мембраны Pseudomonas aeruginosa и исследование их иммуногенных свойств. Биотехнология. 2011, 2: 74-84.][Лазарева А.В., Чеботарь И.В., Крыжановская О.А. и др. Pseudomonas aeruginosa: патогенность, патогенез и патология. Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2015, 17 (3): 170-186.][Солдатенкова А.В., Михайлова Н.А., Зимина Е.М. и др. Получение рекомбинантного слитого белка OprF-aTox Pseudomonas aeruginosa, обладающего защитными свойствами. Биопрепараты. 2016, 16 (2): 96-100.][Chatterjee М., Anju С.Р., Biswas L. et al. Antibiotic resistance in Pseudomonas aeruginosa and alternative therapeutic options, lnt. J. Med. Microbiol. 2016, 306 (1): 48-58.][Doring G., Pier G.B. Vaccines and immunotherapy against Pseudomonas aeruginosa. Vaccine. 2008,26 (8): 1011-1024.][Sambrook J.F., Russell D.W. Molecular Cloning. 2001.]