Aim. Obtaining fused recombinant proteins of Pseudomonas aeruginosa that have protective properties against experimental pseudomonas infection. Materials and methods. Fused sequences of P. aeruginosa genes oprF, oprl and deleted form of toxA were cloned in plasmids for the expression in Escherichia coli. The synthesized recombinant proteins were purified in Ni-sepharose columns. Recombinant proteins were administered to mice intraperitonealiy twice with a 2 week interval to evaluate protective properties. Virulent culture of P. aeruginosa strain PA103 was injected into the animals intraperitonealiy 2 weeks after the immunization course as experimental challenge. Results. 3 fused recombinant proteins were produced: 1. OprF-ΔOprl included full sequence of OprF protein and deletion variant of OprI (lacking first 20 amino acids); 2. AOprF-AOprl consisted of C-terminal region (192 - 342 amino acids) OprF and deletion variant of Oprl protein; 3. OprF-aTox-ΔOprI included full sequence of OprF protein, sequence of nontoxic variant of exotoxin A (without 106 C-terminal amino acids) and deletion variant of Oprl protein. Fused recombinant proteins OprF-AOprl and OprF-aTox-ΔOprI at immunization doses of 25 and 50 pg for the first and second protein, respectively, were shown to have the best protective properties. Conclusion. The results obtained open perspectives for further studies to create specific immune biological preparations based on fused recombinant proteins of P. aeruginosa.
Цель. Получение слитых рекомбинантных белков Pseudomonas aeruginosa, обладающих защитными свойствами от экспериментальной синегнойной инфекции. Материалы и методы. В плазмидах, предназначенных для экспрессии в клетках Escherichia coli, клонированы слитые последовательности генов oprF, oprl и делеционной формы toxA Р aeruginosa. Синтезированные рекомбинантные белки очищали в колонках с никель-сефарозой. При оценке защитных свойств препараты рекомбинантных белков вводили мышам внутрибрюшинно двукратно с двухнедельным интервалом. При экспериментальном заражении живую вирулентную культуру Р. aeruginosa штамма РА103 инъецировали животным внутрибрюшинно через две недели после курса иммунизаций. Результаты. Получены три слитых рекомбинантных белка: 1. OprF-AOprI включал полноразмерную последовательность белка OprF и делеционный вариант белка Oprl (с отсутствием первых 20 аминокислотных остатков); 2. AOprF-AOprI состоял из С-концевой области (192 - 342 аминокислотные остатки) ОprF и делеционного варианта белка Oprl; 3. OprF-aTox-ΔOprl включал полноразмерную последовательность белка OprF, последовательность нетоксичного варианта экзотоксина А (без 106 С-концевых аминокислотных остатков) и делеционный вариант белка Oprl. Показано, что наилучшими защитными свойствами обладали слитые рекомбинантные белки OprF-ΔOprI и OprF-aTox-ΔOprl в иммунизирующих дозах 25 мкг и 50 мкг на животное соответственно для первого и второго белков. Заключение. Полученные результаты открывают перспективы для дальнейших исследований по созданию специфических иммунобиологических препаратов на основе слитых рекомбинантных белков синегнойной палочки.