Journal of microbiology, epidemiology and immunobiologyJournal of microbiology, epidemiology and immunobiologyЖурнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии0372-93112686-7613Central Research Institute for Epidemiology14191ArticlesСтатьиResearch ArticleIMPROVEMENT OF LABORATORY DIAGNOSTICS OF CHOLERA DUE TO GENETICALLY ALTERED (HYBRID) VARIANTS OF CHOLERA VIBRIO BIOVAR EL TORСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ХОЛЕРЫ, ОБУСЛОВЛЕННОЙ ГЕНЕТИЧЕСКИ ИЗМЕНЕННЫМИ (ГИБРИДНЫМИ) ВАРИАНТАМИ ХОЛЕРНОГО ВИБРИОНА БИОВАРА ЭЛЬ ТОРSavelievaI. VСавельеваИ. ВKhatsukovK. KhХацуковК. ХSavelievaE. IСавельеваЕ. ИMoskvitinaS. IМосквитинаС. ИKovalevD. AКовалевД. АSavelievV. NСавельевВ. НKulichenkoA. NКуличенкоА. НAntonenkoA. DАнтоненкоА. ДBabenyshevB. VБабенышевБ. ВStavropol Institute of Plague ControlСтавропольский противочумный институт15022015921NO1 (2015)465113062023Copyright ©; 2015, Savelieva I.V., Khatsukov K.K., Savelieva E.I., Moskvitina S.I., Kovalev D.A., Saveliev V.N., Kulichenko A.N., Antonenko A.D., Babenyshev B.V.Copyright ©; 2015, Савельева И.В., Хацуков К.Х., Савельева Е.И., Москвитина С.И., Ковалев Д.А., Савельев В.Н., Куличенко А.Н., Антоненко А.Д., Бабенышев Б.В.2015Savelieva I.V., Khatsukov K.K., Savelieva E.I., Moskvitina S.I., Kovalev D.A., Saveliev V.N., Kulichenko A.N., Antonenko A.D., Babenyshev B.V.Савельева И.В., Хацуков К.Х., Савельева Е.И., Москвитина С.И., Ковалев Д.А., Савельев В.Н., Куличенко А.Н., Антоненко А.Д., Бабенышев Б.В.https://creativecommons.org/licenses/by/4.0https://microbiol.crie.ru/jour/article/view/14191

Aim. Improvement of laboratory diagnostics of cholera taking into the account appearance of hybrid variants of cholera vibrio El Tor biovar in the 1990s. Materials and methods. Phenotypic and molecular-genetic properties of typical toxigenic (151 strains) and hybrid (102 strains) variants of El Tor biovar cholera vibrios, isolated in the Caucuses in 1970 - 1990 and 1993 - 1998, respectively, were studied. Toxigenicity gene DNA fragments, inherent to El Tor biovars or classic, were detected by using a reagent kit «Genes of Vibrio cholerae variant ctxB-rstR-rstC, REF» developed by us. Results. Reagent kit «Genes of V. cholerae variant ctxB-rstR-rstC, REF» is proposed to be used for laboratory diagnostics of cholera during study of material from humans or environmental objects and for identification of V. cholerae O1 on genome level in PCR-analysis as a necessary addition to the classic scheme of bacteriological analysis. Conclusion. Laboratory diagnostics of cholera due to genetically altered (hybrid) variants of cholera vibrio El Tor biovar is based on a complex study of material from humans and environmental objects by routine bacteriologic and PCR-analysis methods with the aim of detection of gene DNA fragments in the studied material, that determine biovar (classic or El Tor), identification of V. cholerae О1 strains with differentiation of El Tor vibrios into typical and altered, as well as determination of enterotoxin, produced by the specific cholera vibrio strain (by the presence ctxBEl or ctxBcl gene DNA fragment, coding biosynthesis of CT-2 or CT-1, respectively).

Цель. Совершенствование лабораторной диагностики холеры с учетом появления в 90-е годы ХХ столетия гибридных вариантов холерного вибриона биовара Эль Тор. Материалы и методы. Исследованы фенотипические и молекулярно-генетические свойства типичных токсигенных (151 штамм) и гибридных (102 штамма) вариантов холерных вибрионов биовара Эль Тор, выделенных на Кавказе соответственно в 1970 - 1990 гг. и в 1993 - 1998 гг. Детекцию фрагментов ДНК генов токсигенности, присущих биоварам Эль Тор или классическому, осуществляли с помощью разработанного нами набора реагентов «Гены Vibrio cholerae вариант ctxB-rstR-rstC, РЭФ». Результаты. Предложено использовать для лабораторной диагностики холеры при исследовании материала от людей или из объектов окружающей среды и для идентификации Vibrio cholerae O1 на уровне генома в ПЦР-анализе набор реагентов «Гены V. cholerae вариант ctxB-rstR-rstC, РЭФ» в качестве необходимого дополнения к классической схеме бактериологического анализа. Заключение. Лабораторная диагностика холеры, обусловленной генетически измененными (гибридными) вариантами холерного вибриона биовара Эль Тор, должна основываться на комплексном исследовании материала от людей или из объектов окружающей среды рутинным бактериологическим и методом ПЦР-анализа с целью детекции в исследуемом материале фрагментов ДНК генов, определяющих биовар (классический или Эль ^р), идентификации штаммов V. cholerae О1 с дифференциацией Эль Тор вибрионов на типичные и измененные, а также определения типа энтеротоксина, продуцируемого конкретным штаммом холерного вибриона (по наличии фрагментов ДНК генов ctxBEl или ctxBa, кодирующих, соответственно, биосинтез СТ- 2 или СТ-1).

laboratory diagnostics of choleradetection and identification of typical toxigenic and hybrid variants of El Tor biovarлабораторная диагностика холерыдетекция и идентификация типичных токсигенных и гибридные вариантов биовара Эль ТорЛабораторная диагностика холеры. Методические указания. МУК 4.2.2218-07. М., 2007.Савельев В.Н., Савельева И.В., Бабенышев Б.В. и др. Эволюция Vibrio cholerae eltor и обнаружение их гибридных вариантов на Кавказе. Холера и патогенные для человека вибрионы. Ростов-на-Дону, 2011, 24: 86-92.Савельева И.В., Савельева Е.И., Бабенышев Б.В. и др. Анализ фенотипических свойств генетически измененных (гибридных) вариантов биовара Эль Тор, выделенных на Кавказе. Холера и патогенные для человека вибрионы. Ростов-на-Дону, 2013, 26: 123129.Смирнова Н.И., Агафонов Г.А., Заднова С.П. и др. Алгоритм идентификации токсигенных генетически измененных штаммов Vibrio cholerae биовара Эль Тор. Журн. микро-биол. 2014, 2: 36-46.Смирнова, Н.И., Заднова С.П., Шашкова А.П., Кутырев В.В. Вариабельность генома измененных вариантов Vibrio choleraе биовара Эль-Тор, изолированных на территории России в современный период. Молек. генетика, микробиол. и вирусол. 2011, 3: 11 17.Ansaruzzaman M., Bhuiyan N.A., Nair G.B. Cholera in Mozambique, variant of Vibrio cholerae. Emerg. Infect. Dis. 2004, 10: 2057-2059.Grim C.J., Hasan N.A.,Taviani E. et al. Genome sequens of hybrid Vibrio cholera О1 MJ-1236, B-33, and CIRS 101 and cjmharative genomics with V. cholera. J. Bacteriol. 2010, 45: 29913000.Das B., Halder K., Pal P, Bhadra R.K. Small chromosomal integration site ofclassical CTXprophage in Mozambique Vibrio cholerae O1 El Tor strain. Arch. Microbiol. 2007, 188: 677-683.Na-Ubol M. Srimanote P et al. Hybrid El Tor variant biotypes ofVibrio cholera O1 in Thailand. Indian. J. Med. Res. 2011, 133 (4): 387-394.Nair G.B. New variants ofVibrio cholerae O1 biotype El Tor with attributes ofthe classical biotype from hospitalized patients with acute diarrhes in Bangladesh. J. Clin. Microbiol. 2002, 40: 32963299.Nair G.B., Qadri F., Holmgren J. et al. Vibrio cholera O1 hybrid El Tor strains Asia and Africa. J. Clin. Microbiol. 2006, 44: 3296-3299.Raychoudhuri A., Patra T., Ramamurthy T. et al. Classical ctxB in Vibrio cholerae O1, Kalkata, India. Emerg. Infect. Dis. 2009, 15 (1): 131-132.Safa A. Genomic relatedness of the new Matlab variants ofVibrio cholerae O1 to the classical and El Tor biotypes as determined by pulsed-field gel electrophoresis. J. Clin. Microbiol. 2005, 43: 1401-1404.Safa A., Nair G.B., Kong R.Y.G Evolution of new variants of Vibrio cholerae O1. Trends Microbiol. 2010, 18: 46-54Siddique A.K., Nair G.B., Alam M. et al. Eltor cholera with severe disease a new threat to Asia and beuond. Epidemiol. Infect. 2010, 18: 46-54.Weekly epidemiological record. 2011, 86 (31): 325-340.