Journal of microbiology, epidemiology and immunobiologyJournal of microbiology, epidemiology and immunobiologyЖурнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии0372-93112686-7613Central Research Institute for Epidemiology14150ArticlesСтатьиResearch ArticleDETECTION OF VENEZUELAN EQUINE ENCEPHALOMYELITIS VIRUS RNA IN BIOLOGICAL SAMPLES BY REVERSE-TRANSCRIPTION POLYMERASE CHAIN REACTIONВЫЯВЛЕНИЕ РНК ВИРУСА ВЕНЕСУЭЛЬСКОГО ЭНЦЕФАЛОМИЕЛИТА ЛОШАДЕЙ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ПРОБАХ МЕТОДОМ ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПЦИИ-ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИPetrovA. AПетровА. А.PyshnayaN. SПышнаяН. СLebedevV. NЛебедевВ. НKulishV. SКулишВ. С.StovbaL. FСтовбаЛ. ФKazantsevA. VКазанцевА. ВBorisevichS. VБорисевичС. В48th Research Institute of the Ministry of Defense of Russian Federation48 Центральный НИИ МО РФ15122015926NO6 (2015)№6 (2015)828609062023Copyright ©; 2015, Petrov A.A., Pyshnaya N.S., Lebedev V.N., Kulish V.S., Stovba L.F., Kazantsev A.V., Borisevich S.V.Copyright ©; 2015, Петров А.А., Пышная Н.С., Лебедев В.Н., Кулиш В.С., Стовба Л.Ф., Казанцев А.В., Борисевич С.В.2015Petrov A.A., Pyshnaya N.S., Lebedev V.N., Kulish V.S., Stovba L.F., Kazantsev A.V., Borisevich S.V.Петров А.А., Пышная Н.С., Лебедев В.Н., Кулиш В.С., Стовба Л.Ф., Казанцев А.В., Борисевич С.В.https://creativecommons.org/licenses/by/4.0https://microbiol.crie.ru/jour/article/view/14150

Aim. Detection and identification of Venezuelan equine encephalomyelitis (VEE) virus RNA in biological samples by reverse-transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and RT-PCR in real time (rRT-PCR). Materials and methods. VEE, Sindbis, West Nile, Japanese and tick-borne encephalitis viruses were studied. Cell culture of chicken fibroblasts, outbred mice and rats, Javanese macaques were used in the experiments. Biological activity determination of the running culture of causative agents used in the experiments was carried out by negative colony method in monolayer cell culture under agar coating and using intra-cerebral infection of mice. Reagent kits developed in the 48th Central Research Institute and Institute of Analytical Instrument Engineering were used during execution of experiments of VEE virus RNA detection by RT-PCR and rRT-PCR. Results. VEE virus was detected in biological samples by various methods. Data from RT-PCR and rRT-PCR are in accordance with the results of virus detection in samples using sensitive animals. Conclusion. Use of molecular-diagnostics methods for detection in biological samples of a causative agent of a dangerous infectious disease is important for procuring biological safety of Russian Federation.

Цель. Выявление и идентификация РНК вируса венесуэльского энцефаломиелита лошадей (ВЭЛ) в биологических пробах методами обратной транскрипции-полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) и ОТ-ПЦР в реальном времени (ОТ-ПЦР-РВ). Материалы и методы. Исследованы вирусы ВЭЛ, Синдбис, Западного Нила, японского и клещевого энцефалита. В экспериментах использовали культуру клеток куриных фибробластов, беспородных мышей и крыс, яванских макаков. Определение биологической активности использованных в экспериментах рабочих культур возбудителей проводили методом негативных колоний на монослойной культуре клеток под агаровым покрытием и с помощью внутримозгового инфицирования мышей. При проведении экспериментов по выявлению РНК вируса ВЭЛ методами ОТ-ПЦР и ОТ-ПЦР-РВ в биологических пробах использовали разработанные в 48 Центральном НИИ и Институте аналитического приборостроения наборы реагентов. Результаты. Выявлен вирус ВЭЛ в биологических пробах различными методами. Данные ОТ-ПЦР и ОТ-ПЦР-РВ согласуются с результатами выявления вируса в пробах с использованием чувствительных животных. Заключение. Использование методов молекулярной диагностики для выявления в биологических пробах возбудителя опасного инфекционного заболевания имеет важное значение для обеспечения биологической безопасности РФ.

VEE virusRNAreverse transcriptionPCRbiological samplelaboratory animalsexperimental infectionвирус ВЭЛРНКобратная транскрипцияПЦРбиологическая пробалабораторные животныеэкспериментальная инфекцияГенес В.С. Некоторые простые методы кибернетической обработки данных диагностических и физиологических исследований. М., Медицина, 1967.Здродовский П.Ф., Соколов М.И. Руководство по лабораторной диагностике вирусных и риккетсиозных болезней. М., Медицина, 1965.Bowen G.S., Fashinell T.R., Dean P.B., Gregg M.B. Clinical aspects of human Venezuelan equine encephalitis in Texas. Bull. Pan. Am. Health Organ. 1976, 10: 46-57.Johnson K.M, Martin D.H. Venezuelan equine encephalitis. Adv. Vet. Sci. Comp. Med. 1974, 18 (I) : 79-116.Kubes V, Rios F.A. The causative agent of infectious equine encephalomyelitis in Venezuela. Science. 1939, 90 (1): 20-21.Linnsen B., Kinney R.M., Agnilar P et al. Development of reverse-transcription-PCR assay specific for detection of equine encephalitis viruses. J. Clin. Microbiol. 2000, 38(15): 1527-1535.Oberste M.S., Fraire M., Navarro R. Association of Venezuelan equine encephalitis virus subtype IE with two equine epizootics in Mexico. Am. J. Trop. Med. Hyg. 1998, 59 (1): 100-107.Pisano M.B., Seco M.PS., Re YE. et al. Specific detection of all members ofVEE complex development of a RT-nested PCR. J. Virol. Met. 2012, 185 (1): 203-206.Rico-Hesse R., Weaver S.C., de Siger J. et al. Emergence of a new epidemic/epizootic Venezuelan equine encephalitis virus in South America. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995, 92 (16): 52785281.Rivas F., Diaz L.A., Cardenas YM. Epidemic Venezuelan equine encephalitis in La Guajira, Colombia, 1995. J. Infect. Dis. 1997, 175 (4): 828-832.Salas R.A., Garcia C.Z., Liria J. Ecological studies of enzootic Venezuelan equine encephalitis in north-central Venezuela 1997 - 1998. Am. J. Trop. Med. Hyg. 2001, 64 (1): 84-92.Walton T.E., Grayson M.A. Venezuelan equine encephalomyelitis. In: Monath T.P (ed.). The Arboviruses: Epidemiology and Ecology. Boca Raton Florida, CRC Press, 1988, р. 203-231.Wang E., Paessler S., Agnilar P et al. Reverse transcription-PCR-enzyme linked immunosorbent assay for rapid detection and differentiation of alpha virus infection. J. Clin. Microbiol. 2006, 44 (II) : 4000-4008.Weaver S.C., Ferro C., Barrera R. Venezuelan equine encephalitis. Ann. Rev. Entomol. 2004, 49 (1): 141-174.Weaver S.C., Pfeffer M., Marriott K. et al. Genetic evidence for the origins of Venezuelan equine encephalitis virus subtype IAB outbreaks. Am. J. Trop. Med. Hyg. 1999, 60 (2): 441-448.