Aim. Isolate bacteriocins from Enterococcus faecium metabolites and characterize their effect on cells of Gram positive (Listeria monocytogenes) and Gram negative (Escherichia coli) bacteria. Materials and methods. Methods of solid-phase extraction, ion-exchange and reverse-phase chromatography were applied for isolation of bacteriocins from cultural medium of bacteria. MALDI time-of-flight mass-spectrometry was used for characterization of the obtained preparations. The mechanism ofbiological effect of peptides was evaluated using DNA-tropic dyes (SYTO 9 and PI) with subsequent registration of fluorescence spectra. Atomic-force microscopy (AFM) was used for characterization of morpho-functional reaction of target cells. Results. Peptide fractions with mass of 1.0 - 3.0 kDa were isolated from enterococci metabolites, that inhibit the growth of indicator microorganisms. E. faecium strain exoproducts were shown to increase membrane permeability during interaction with L. monocytogenes, that results in subsequent detectable disturbance of normal cell morphology of listeria. Alterations of E. coli surface during the effect of purified peptide fraction was detected using AFM. Conclusion. The studies carried out have revealed the effect ofbacteriocins of enterococci on microorganisms with various types of cell wall composition and have confirmed the importance of bacterial barrier structure permeability disturbance in the mechanism of antimicrobial effect of enterocins.
Цель. Выделить бактериоцины из метаболитов Enterococcus faecium и охарактеризовать их влияние на клетки грамположительных (Listeria monocytogenes) и грамотрицательных (Escherichia coli) бактерий. Материалы и методы. Для выделения бактериоцинов из культуральной среды бактерий применяли методы твердофазной экстракции, ионообменной и обращенно-фазовой хроматографии. Для характеристики массового состава полученных препаратов использовали MALDI времяпролетную масс-спектрометрию. Механизм биологического действия пептидов оценивали с использованием ДНК-тропных красителей (SYTO 9 и PI) с последующей регистрацией спектров флуоресценции. Для характеристики морфофункциональной реакции клеток-мишеней использовали атомно-силовую микроскопию (АСМ). Результаты. Из метаболитов энтерококков выделены пептидные фракции массой 1,0 - 3,0 кДа, подавляющие рост индикаторных микроорганизмов. Показано, что экзопродукты штаммов E. faecium при взаимодействии с L. monocytogenes увеличивают проницаемость мембран, что ведет в последующем к детектируемому нарушению нормальной клеточной морфологии листерий. С помощью АСМ выявлено изменение поверхности E. coli при воздействии очищенных пептидных фракций. Заключение. Проведенные исследования выявили влияние бактериоцинов энтерококков на микроорганизмы с различным типом строения клеточной стенки и подтвердили важность нарушения проницаемости бактериальных барьерных структур в механизме антимикробного действия энтероцинов.