Journal of microbiology, epidemiology and immunobiologyJournal of microbiology, epidemiology and immunobiologyЖурнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии0372-93112686-7613Central Research Institute for Epidemiology13989ArticlesСтатьиResearch ArticleMALDI-TOF MASS-SPECTROMETRIC ANALYSIS OF CELL PROTEINS DURING IDENTIFICATION OF LEPTOSPIRA GENUS MEMBERSMALDI-TOF МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ КЛЕТОЧНЫХ БЕЛКОВ В ИДЕНТИФИКАЦИИ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ РОДА LEPTOSPIRABrenevaN. VБреневаН. ВAfanasievM. VАфанасьевМ. ВSharakshanovM. BШаракшановМ. БOstyakA. SОстякА. СKiselevaE. YuКиселеваЕ. ЮSamsonovaA. PСамсоноваА. ПPetrovE. MПетровЕ. МViktorovaE. VВиктороваЕ. ВBalakhonovS. VБалахоновС. ВIrkutsk Research Institute of Plague Control, RussiaИркутский научно-исследовательский противочумный институтGamaleya Research Institute of Epidemiology and Microbiology, RussiaНИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи, МоскваRussian State Centre of Quality and Standardization of Medicinal Agents for Animals and Forage, Moscow, RussiaВсероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов, Москва15082014914NO4 (2014)№4 (2014)364309062023Copyright ©; 2014, Breneva N.V., Afanasiev M.V., Sharakshanov M.B., Ostyak A.S., Kiseleva E.Y., Samsonova A.P., Petrov E.M., Viktorova E.V., Balakhonov S.V.Copyright ©; 2014, Бренева Н.В., Афанасьев М.В., Шаракшанов М.Б., Остяк А.С., Киселева Е.Ю., Самсонова А.П., Петров Е.М., Викторова Е.В., Балахонов С.В.2014Breneva N.V., Afanasiev M.V., Sharakshanov M.B., Ostyak A.S., Kiseleva E.Y., Samsonova A.P., Petrov E.M., Viktorova E.V., Balakhonov S.V.Бренева Н.В., Афанасьев М.В., Шаракшанов М.Б., Остяк А.С., Киселева Е.Ю., Самсонова А.П., Петров Е.М., Викторова Е.В., Балахонов С.В.https://creativecommons.org/licenses/by/4.0https://microbiol.crie.ru/jour/article/view/13989

Aim. Development of methodological approaches for identification of leptospira by using MALDI-TOF direct protein profiling technology. Materials and methods. Analysis of cell proteins of 34 leptospira strains was carried out in Microflex LT by using «MALDI Biotyper 3.0 for identification and classification of microorganisms» program. Results. 19 reference spectra of reference leptospira strains from 7 species were generated and imported into MALDI Biotyper 3.0 database. Identification of 6 strains with undetermined taxonomic position was carried out. Conclusion. The approved method allows determination of leptospira species with accuracy that depends on their adaptation to nutrient media, preparation approach and sample storage conditions for mass-spectrometry.

Цель. Разработка методологических подходов идентификации лептоспир с использованием технологии прямого белкового профилирования MALDI-TOF. Материалы и методы. Проведен анализ клеточных белков 34 штаммов лептоспир на приборе Microflex LT с использованием программного обеспечения «MALDI Biotyper 3.0 для идентификации и классификации микроорганизмов». Результаты. Сгенерированы и импортированы в базу данных MALDI Biotyper 3.0 19 референсных спектров эталонных штаммов лептоспир 7 видов. Проведена идентификация 6 штаммов с неопределенным таксономическим положением. Заключение. Апробированная методика позволяет определять вид лептоспир с достоверностью, зависящей от адаптации их к питательным средам, способа подготовки и условий хранения образцов для масс-спектрометрии.

leptospiraidentificationmass-spectrometryлептоспирыидентификациямасс-спектрометрияАнаньина Ю.В. Лептоспирозы людей и животных: тенденции распространения и проблемы профилактики. Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2010, 2: 13-16.Закс Л. Статистическое оценивание. Под ред. Ю.П. Адлера, В.Г. Горского. М., Статистика, 1976.Малахов Ю.А., Панин А.Н., Соболева Г.Л. Лептоспироз животных. Ярославль, ДИА-пресс, 2001.Маянский Н.А., Калакуцкая А.Н, Мотузова О.В. и др. MALDI-TOF масс-спектрометрия в рутинной работе микробиологической лаборатории. Вопросы диагностики в педиатрии. 2011, 3 (5): 20-25.Ahmed A., Anthony R.M., Hartskeerl R.A. A simple and rapid molecular method for Leptospira species identification. Inf. Gen. Evol. 2010, 10: 955-962.Ahmed N., Devi S.M., Valverde M.A. et al. Multilocus sequence typing method for identification and genotypic classification of pathogenic Leptospira species. Ann. Clin. Microbiol. Antimicrob. 2006, 5 (28) (doi:10.1186/1476-0711-5-28).Djelouadji Z., Roux V., Raoult D. et al. Rapid MALDI-TOF mass spectrometry identification of Leptospira organisms. Vet. Microbiol. 2012, 158: 142-146.Cullen P.A. Cordwell S.J., Bulach D.M. et al. Global analysis of outer membrane proteins from Leptospira interrogans serovar lai. Infect. Immun. 2002, 70 (5): 2311-2318.MALDI Biotyper 3.0 User Manual. Revision 1, January 2011. Bruker Daltonics GmbH.Paster B.J. Phylum XV. Spirochaetes Garrity and Holt 2001. Bergey's Manual of Systematic Bacteriology. Springer, 2010.Rettinger A., Krupka I., Grunwald K. et al. Leptospira spp. strain identification by MALDI TOF MS is an equivalent tool to 16S rRNA gene sequencing and multi locus sequence typing (MLST). BMC Microbiology. 2012, 12 (185) (doi:10.1186/1471-2180-12-185).Slack A.T, Khairani-Bejo S., Symonds M.L. et al. Leptospira kmetyi sp. nov., isolated from an environmental source in Malaysia. Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2009, 59 (4): 705-708.Vieira M.L. Pimenta D.C., de Morais Z.M. et al. Proteome Analysis of Leptospira interrogans virulent strain. Open Microbiology J. 2009, 3: 69-74.http://www.kit.nl/kit/Leptospirosis-Reference-Centre (дата просмотра 11.02.13).