Journal of microbiology, epidemiology and immunobiologyJournal of microbiology, epidemiology and immunobiologyЖурнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии0372-93112686-7613Central Research Institute for Epidemiology13984ArticlesСтатьиResearch ArticleCOLLECTION OF VIBRIO PARAHAEMOLYTICUS SPECIES MEMBERS: PHENOTYPIC AND GENOTYPIC CHARACTERISTICSКОЛЛЕКЦИЯ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ ВИДА VIBRIO PARAHAEMOLYTICUS: ФЕНОТИПИЧЕСКИЕ И ГЕНОТИПИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИRykovskayaO. AРыковскаяО. АSmolikovaL. MСмоликоваЛ. МMonakhovaE. VМонаховаЕ. ВChemisovaO. SЧемисоваО. СPodoinitsinaO. AПодойницынаО. АGolenischevaE. NГоленищеваЕ. НSanamyantsE. MСанамянцЕ. МSagakyantsM. MСагакянцМ. МDalikovaR. RДаликоваР. РRostov Research Institute of Plague Control, Rostov-on-Don, RussiaРостовский научно-исследовательский противочумный институт, Ростов-на-Дону15122014916NO6 (2014)№6 (2014)3909062023Copyright ©; 2014, Rykovskaya O.A., Smolikova L.M., Monakhova E.V., Chemisova O.S., Podoinitsina O.A., Golenischeva E.N., Sanamyants E.M., Sagakyants M.M., Dalikova R.R.Copyright ©; 2014, Рыковская О.А., Смоликова Л.М., Монахова Е.В., Чемисова О.С., Подойницына О.А., Голенищева Е.Н., Санамянц Е.М., Сагакянц М.М., Даликова Р.Р.2014Rykovskaya O.A., Smolikova L.M., Monakhova E.V., Chemisova O.S., Podoinitsina O.A., Golenischeva E.N., Sanamyants E.M., Sagakyants M.M., Dalikova R.R.Рыковская О.А., Смоликова Л.М., Монахова Е.В., Чемисова О.С., Подойницына О.А., Голенищева Е.Н., Санамянц Е.М., Сагакянц М.М., Даликова Р.Р.https://creativecommons.org/licenses/by/4.0https://microbiol.crie.ru/jour/article/view/13984

Aim. Formation of Vibrio parahaemolyticus collection according to modern methodical opportunities and understanding of causative agent biology. Materials and methods. Traditional biochemical tests and PCR-testing of species-specific genes were used to confirm species membership. Catalase, DNAse, proteolytic and tweenase activity was determined by common methods. Virulence was evaluated by a complex method: hemolytic activity was determined in Kanagawa test (KT), urease - in Christensen medium, PRC-testing of tdh and trh genes. Serotyping was carried out with a commercial O/K-sera kit. PCR-genotyping was carried out by marker genes of 7 pathogenicity islands (VPaI-1-7). Results. Species membership was confirmed for the studied strains. Serologic typing allowed to detect members of 18 serologic groups among the collection strains. All the collection cultures were divided into 4 groups based on KT-Ure-tdh-trh features recombination. A number of genetic variants were detected, strains belonging to a pandemic group and O3:K6 serogroup were determined. Conclusion. A collection of V. parahaemolyticus cultures was formed and characterized by a large set of pheno- and genotypic features. A database was developed including information on strain origins, pheno- and genetic features, with genetic variants given, for ease of use of the collection.

Цель. Формирование коллекции Vibrio parahaemolyticus вибрионов в соответствии с современными методическими возможностями и представлениями о биологии возбудителя. Материалы и методы. Для подтверждения видовой принадлежности были использованы традиционные биохимические тесты и ПЦР-тестирование видоспецифических генов. Каталазную, ДНКазную, протеолитическую и твиназную активность определяли общепринятыми методами. Вирулентность оценена комплексным методом: гемолитическую активность определяли в тесте Канагава (КР), уреазную - на среде Кристенсена, ПЦР-тестирование генов tdh и trh. Серотипирование осуществляли с помощью коммерческого набора О/К-сывороток. ПЦР-генотипирование проведено по маркерным генам семи островов патогенности (VPaI-1-7). Результаты. У изученных штаммов подтверждена их видовая принадлежность. Серологическое типирование позволило выявить среди коллекционных штаммов представителей 18 серологических групп. На основе переком-бинаций признаков КР-Ure-tdh-trh все коллекционные культуры были разделены на 4 группы. Выявлено множество генетических вариантов, определены штаммы, принадлежащие к пандемичной группе и относящиеся к серогруппе О3:К6. Заключение. Сформирована коллекция культур V.parahaemolyticus, охарактеризованная по большому набору фено- и генотипических признаков. Для удобства пользования созданной коллекцией разработана база данных, в которую включена информация о происхождении штаммов, фено- и генетических признаках и приведены генетические варианты.

Vibrio parahaemolyticusserogroupPCR-genotypingpathogenicity islandspandemic clonespecies-specific genesсерогруппаПЦР-генотипированиеострова патогенностипандемичный клонвидоспецифичные геныАдамов А.К., Наумшина М.С. Холерные вибрионы. Саратов, 1984.Либинзон А.Е., Ус З.И., Нагорная А.Ф. и др. Этиологическая структура пищевых токсикоинфекций, вызванных морскими галофильными вибрионами. Журн. микробиол. 1994, 6: 20-21.Рыковская О.А., Шалу О. А., Монахова Е. В. и др. Комплексный метод оценки вирулентности парагемолитических вибрионов. Клин. лаб. диагностика. 2013, 2: 38-41.Сиволодский Е.П., Котив Б.Н., Колобова Е.Н. и др. Выделение Shewanella algae из плеврального экссудата больного пневмонией. Журн.микробиол. 2012, 5: 74-76.Шалу О.А., Писанов Р.В., Монахова Е.В. Эффективность экспрессии гена trh Vibrio parahaemolyticus зависит от двух точковых мутаций в его промоторной области. Генетика. 2012, 48 (12): 1364-1371.Bergey's Manual of Systematic Bacteriology. New Ybrk, Springer, 2005.Boyd E.F., Cohen A.L., Naughton L.M. et al. Molecular analysis of the emergence of pandemic Vibrio parahaemolyticus. BMC Genomics. 2008, 8: 110-123.Di Pinto A., Ciccarese G., Tantillo G. A collagenase-targeted bultiplex PCR assay for identification ofVibrio alginolyticus, Vibrio cholerae, and Vibrio parahaemolyticus. J. Food Protection. 2005, 68 (1):150-153.Hayashi S., Okura M., Osawa R. Soft-agar-coated filter method for earley detection of viable and thermostable direct hemolysin (TDH) - or TDH-related haemolysin-producing Vibrio parahaemolyticus in seafood. Appl. Environ. Microbiol. 2006, 72 (7): 4576-4582.Iwata M., Tateda K., Matsumoto T. et al. Primari Shewanella algae septicemia in a patient on hemodialysis. J.Clin.Microbiol. 1999, 37: 2104.Nair G. B., Ramamurthy T., Bhattacharya S. K. et al. Global dissemination of Vibrio parahaemolyticus serotype O3:K6 and its serovariants. din. Microbiol. 2007, 20 (1): 39-48.Okada N., Iida T., Park K.-S. et al. Identification and characterization of a novel type III secretion system in trh-positive Vibrio parahaemolyticus strain TH3996 reveal genetic lineage and diversity of pathogenic machinery beyond the species level. Infect. Immun. 2009, 77 (2): 904-913.Okuda J., Ishibashi M., Hayakawa E. et al. Emergence of unique O3:K6 clone of Vibrio para-haemolyticus in Calcutta, India, and isolation of strains from the same clonal group from Southeast Asian travelers arriving in Japan. J. Clin. Microbiol. 997, 35: 3150-3155.Park K.S., Ono T., Rokuda M. et al. Functional characterization of two type III secretion systems of Vibrio parahaemolyticus. Infect. Immun. 2004, 72 (11): 6659-6665.Tan C.K., Lai C.C., Ruar W.K. et al. Purulent perikarditis with greenish pericardial effusion caused by Shewanella algae. J.Clin.VMicrobiol. 2008,45: 2817-2819.Venkateswaran K., Dohmoto N., Harayama S. Cloning and nucleotide sequence of the gyrB gene of Vibrio parahaemolyticus and its application in detection of this pathogen in shrimp. Appl. Environ. Microbiol. 1998, 64 (2): 681-687.Ward L.N., Bej A.K. Detection of Vibrio parahaemolyticus in shellfish by use of multiplexed real-time PCR with TaqMan fluorescent probes. Appl. Environ. Microbiol. 2006, 72 (3): 20312042.