Journal of microbiology, epidemiology and immunobiologyJournal of microbiology, epidemiology and immunobiologyЖурнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии0372-93112686-7613Central Research Institute for Epidemiology13670ArticlesСтатьиDETECTION OF RUBELLA VIRUS RNA IN CLINICALMATERIAL BY REAL TIME POLYMERASECHAIN REACTION METHODВЫЯВЛЕНИЕ РНК ВИРУСА КРАСНУХИ ВКЛИНИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ МЕТОДОМПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ ВРЕЖИМЕ РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИDomonovaE AДомоноваЭ А

Центральный НИИ эпидемиологии, Москва

ShipulinaO YuШипулинаО Ю

Центральный НИИ эпидемиологии, Москва

KuevdaD AКуевдаД А

Центральный НИИ эпидемиологии, Москва

LarichevV FЛаричевВ Ф

НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского, Москва

SafonovaA PСафоноваА П

Центральный НИИ эпидемиологии, Москва

BurchikM AБурчикМ А

Инфекционная клиническая больница № 2, Москва

ButenkoA MБутенкоА М

НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского, Москва

ShipulinG AШипулинГ А

Центральный НИИ эпидемиологии, Москва

DomonovaE A

Central Research Institute of Epidemiology, Moscow, Russia

ShipulinaO Yu

Central Research Institute of Epidemiology, Moscow, Russia

KuevdaD A

Central Research Institute of Epidemiology, Moscow, Russia

LarichevV F

Ivanovsky Research Institute of Virology, Moscow, Russia

SafonovaA P

Central Research Institute of Epidemiology, Moscow, Russia

BurchikM A

Infectious Diseases Clinical Hospital No. 2, Moscow, Russia

ButenkoA M

Ivanovsky Research Institute of Virology, Moscow, Russia

ShipulinG A

Central Research Institute of Epidemiology, Moscow, Russia

Центральный НИИ эпидемиологии, МоскваНИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского, МоскваИнфекционная клиническая больница № 2, МоскваНИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского, МоскваCentral Research Institute of Epidemiology, Moscow, RussiaIvanovsky Research Institute of Virology, Moscow, RussiaInfectious Diseases Clinical Hospital No. 2, Moscow, Russia15032012891NO1 (2012)№1 (2012)606709062023Copyright ©; 2012, Domonova E.A., Shipulina O.Y., Kuevda D.A., Larichev V.F., Safonova A.P., Burchik M.A., Butenko A.M., Shipulin G.A., Domonova E.A., Shipulina O.Y., Kuevda D.A., Larichev V.F., Safonova A.P., Burchik M.A., Butenko A.M., Shipulin G.A.Copyright ©; 2012, Домонова Э.А., Шипулина О.Ю., Куевда Д.А., Ларичев В.Ф., Сафонова А.П., Бурчик М.А., Бутенко А.М., Шипулин Г.А., Domonova E.A., Shipulina O.Y., Kuevda D.A., Larichev V.F., Safonova A.P., Burchik M.A., Butenko A.M., Shipulin G.A.2012Domonova E.A., Shipulina O.Y., Kuevda D.A., Larichev V.F., Safonova A.P., Burchik M.A., Butenko A.M., Shipulin G.A., Domonova E.A., Shipulina O.Y., Kuevda D.A., Larichev V.F., Safonova A.P., Burchik M.A., Butenko A.M., Shipulin G.A.Домонова Э.А., Шипулина О.Ю., Куевда Д.А., Ларичев В.Ф., Сафонова А.П., Бурчик М.А., Бутенко А.М., Шипулин Г.А., Domonova E.A., Shipulina O.Y., Kuevda D.A., Larichev V.F., Safonova A.P., Burchik M.A., Butenko A.M., Shipulin G.A.https://creativecommons.org/licenses/by/4.0https://microbiol.crie.ru/jour/article/view/13670

Aim. Development of a reagent kit for detection of rubella virus RNA in clinical material by PCR-RT. Materials and methods. During development and determination of analytical specificity and sensitivity DNA and RNA of 33 different microorganisms including 4 rubella strains were used. Comparison of analytical sensitivity of virological and molecular-biological methods was performed by using rubella virus strains Wistar RA 27/3, M-33, «Orlov», Judith. Evaluation of diagnostic informativity of rubella virus RNA isolation in various clinical material by PCR-RT method was performed in comparison with determination of virus specific serum antibodies by enzyme immunoassay. Results. A reagent kit for the detection of rubella virus RNA in clinical material by PCR-RT was developed. Analytical specificity was 100%, analytical sensitivity - 400 virus RNA copies per ml. Analytical sensitivity of the developed technique exceeds analytical sensitivity of the Vero E6 cell culture infection method in studies of rubella virus strains Wistar RA 27/3 and «Orlov» by 1 lg and 3 lg, and for M-33 and Judith strains is analogous. Diagnostic specificity is 100%. Diagnostic specificity for testing samples obtained within 5 days of rash onset: for peripheral blood sera - 20.9%, saliva - 92.5%, nasopharyngeal swabs - 70.1%, saliva and nasopharyngeal swabs - 97%. Positive and negative predictive values of the results were shown depending on the type of clinical material tested. Conclusion. Application of reagent kit will allow to increase rubella diagnostics effectiveness at the early stages of infectious process development, timely and qualitatively perform differential diagnostics of exanthema diseases, support tactics of anti-epidemic regime.

Цель. Разработка набора реагентов для выявления РНК вируса краснухи в клиническом материале методом ПЦР-РВ. Материалы и методы. При разработке, определении аналитической специфичности и чувствительности использовали ДНК и РНК 33 различных микроорганизмов, в том числе 4 штаммов вируса краснухи. Сравнение аналитической чувствительности вирусологического и молекулярно-биологического методов проводили с использованием штаммов вируса краснухи Wistar RA 27/3, M-33, «Орлов», Judith. Оценку диагностической информативности выявления РНК вируса краснухи в различном клиническом материале методом ПЦР-РВ проводили в сопоставлении с определением вирусоспецифических антител в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа. Результаты. Разработан набор реагентов для выявления РНК вируса краснухи в клиническом материале методом ПЦР-РВ. Аналитическая специфичность составляет 100%, аналитическая чувствительность - 400 копий РНК вируса/мл. Аналитическая чувствительность разработанной методики превышает аналитическую чувствительность метода заражения культуры клеток Vero E6 при исследовании штаммов вируса краснухи Wistar RA 27/3 и «Орлов» на 1 lg и 3 lg, а M-33 и Judith - аналогична. Диагностическая специфичность составляет 100%. Диагностическая чувствительность при тестировании образцов, полученных до 5 дня с момента появления сыпи: для плазмы периферической крови - 20,9%, слюны - 92,5%, назофарингеальных мазков - 70,1%, слюны и назофарингеальных мазков - 97%. Показана предсказательная ценность положительного и отрицательного результата в зависимости от вида тестируемого клинического материала. Заключение. Применение набора реагентов позволит повысить эффективность диагностики краснухи на ранних этапах развития инфекционного процесса, своевременно и качественно проводить дифференциальную диагностику экзантемных заболеваний, обосновать тактику противоэпидемического режима.

rubellarubella virus RNAreal time PCRdiagnosticsкраснухаРНК вируса краснухиПЦР в режиме реального временидиагностикаГОСТ Р 53079.1-2008. Технологии лабораторные клинические. Обеспечение качества клинических лабораторных исследований. Часть 1. Правила описания методов исследования. М., Стандартинформ, 2009.ГОСТ Р 53022.2-2008. Технологии лабораторные клинические. Требования к качеству клинических лабораторных исследований. Часть 2. Оценка аналитической надежности методов исследования (точность, чувствительность, специфичность). М., Стандартинформ, 2009.ГОСТ Р 53022.3-2008. Технологии лабораторные клинические. Требования к качеству клинических лабораторных исследований. Часть 3. Правила оценки клинической информативности лабораторных тестов. М., Стандартинформ, 2009.Десятскова Р.Г., Заргарьянц А.И., Степанов А.В. и др. Авидность иммуноглобулина G к вирусу краснухи при поствакцинальном и постинфекционном иммунитете. Журн. микробиол. 2007, 4: 6-11.Кицак В.Я. Вирусные инфекции беременных: патология плода и новорожденных. Кольцово, 2004.Руководство по лабораторной диагностике кори и краснухи. Вторая редакция. Женева, 2007.Руководство по эпидемиологическому надзору за корью, краснухой и синдромом врожденной краснухи в Европейском регионе ВОЗ. Копенгаген,2010.Эпидемиологический надзор за корью, краснухой и эпидемическим паротитом: Методические указания. МУ 3.1.2.1177-02. М., Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России, 2003.Эпидемиологический надзор за врожденной краснухой. Методические указания. МУ 3.1.2.2356-08. М., 2008.Banatvala J.E. Clinical features: post-natally acquired rubella. In: Banatvala J.E., Peckham C. (ed). Perspectives in medical virology. 15. Rubella viruses. Amsterdam, Elsevier, 2007, р. 19-37.Best J.M., O'Shea S., Tipples G. et al. Interpretation of rubella serology in pregnancy - pitfalls and problems. BMJ. 2002, 325 (7356): 147-148.Best J.M., Enders G. Laboratory diagnosis of rubella and congenital rubella. In: Banatvala J.E., Peckham C. (ed). Perspectives in medical virology. 15. Rubella viruses. Amsterdam, Elsevier, 2007, р. 39-78.Epidemiology and prevention of vaccinepreventable diseases. Atlanta, 2004.Pasloske B.L., Walkerpeach C.R., Obermoeller R.D. et al. Armored RNA technology for production of ribonuclease-resistant viral RNA controls and standards. J. Clin. Microbiol. 1998, 36: 3590-3594.Standardization of the nomenclature for genetic characteristics of wild-type rubella viruses. Wkly Epidemiol. Rec. 2005, 80 (14): 126-132.