Aim. Isolation and characteristics ofvaginal lactobacilli that actively generate H2O2 and have high antagonistic activity. Materials and methods. Staphylococcus aureus 8956, Escherichia coli 8852, Klebsiella pneumoniae 8795 and Candida albicans 5646 were used as target-strains. Skim milk and MRS medium were used for lactobacilli isolation and cultivation. Antagonism was studied in complete agar and Saburo medium. Merckoquant peroxide test (Merck) stripes were used for the determination of H2O2. Antibacterial activity was determined by diffusion into agar. Specific culture growth rate was determined by conventional method, acidification of the culture medium - by pH-meter. Results. 12 strains were isolated from vaginal smears of healthy women. These strains have an ability to ferment milk among which a highly active H2O2 producer was isolated and attributed to Lactobacillus delbrueckii by the results of 16S rRNA and а-subunit RNA polymerase gene sequence analysis (16S rDNA and rpoA genes are registered in GenBank, numbers HQ379171 and HQ379180 respectively). L.delbrueckii MH-10 bacterial cells were characterized by specific growth speed 1.26 per hour, reaching a maximum titer of 2x109 PFU/ml with lowering medium pH to 4.0. Under aerated conditions H2O2 concentration reached 100 pg/ml or more. L.delbrueckii MH-10 has high antibacterial activity against S.aureus, E.coli, K.pneumoniae.Conclusion. L.delbrueckii MH-10 isolate is an active H2O2 producer, has high growth speed and broad antibacterial activity spectrum, is a perspective candidate for the development of probiotic preparation for the prophylaxis and therapy of vaginoses.
Цель. Выделение и характеристика вагинальных лактобацилл, активно образующих H2O2 и обладающих высокой антагонистической активностью. Материалы и методы. В качестве штаммов-мишеней использованы - Staphylococcus aureus 8956, Escherichia coli 8852, Klebsiella pneumoniae 8795 и Candida albicans 5646. Для выделения и культивирования лактобацилл использовали снятое молоко и среду MRS. Антагонизм изучали на полноценном агаре и среде Сабуро. Для определения H2O2 использовали полоски Merckoquant peroxide test (Merck). Антибактериальную активность определяли методом диффузии в агаре. Удельную скорость роста культур определяли по общепринятой методике, а закисление культуральной среды - с помощью pH-метра. Результаты. Из мазков, взятых из влагалищ здоровых женщин, были изолированы 12 штаммов, обладающих способностью ферментировать молоко, среди которых был выделен высокоактивный продуцент H2O2, отнесенный по результатам анализа последовательностей генов 16S рРНК и а-субъединицы РНК полимеразы к Lactobacillus delbrueckii (последовательности нуклеотидов 16S рДНК и rpoА генов зарегистрированы в GenBank под №№ HQ379171 и HQ379180, соответственно). Бактериальные клетки L. delbrueckii MH-10 характеризовались удельной скоростью роста 1,26 ч-1, достигая максимального титра 2x109 КОЕ/мл, снижая при этом pH среды до 4,0. В аэрируемых условиях концентрация H2O2 доходила до 100 мкг/мл и более. L .delbrueckii MH-10 обладает высокой антибактериальной активностью по отношению к S. aureus, E. coli, K. pneumoniae. Заключение. Выделенный штамм L. delbrueckii MH-10 - активный продуцент H2O2, обладает высокой скоростью роста и широким спектром антибактериальной активности, перспективен в качестве кандидата для разработки пробиотического препарата для профилактики и лечения вагинозов.