Aim. Study of bactericidal effect of phenol on Yersinia pseudotuberculosis produced in various nutrient media. Materials and methods. Bacteria were produced in nutrient broth (NB) and NB with glucose (NB+Glu) or galactose (NB+Gal) at 80 C. Effect of phenol on bacteria was evaluated by changes in optical density of suspension and quantity of viable cells, and by staining of cells with ethidium bromide. Lipids were analyzed by thin-layer and gas-liquid chromatography, gas-liquid- -chromatography - mass-spectrometry, differential scanning calorimetry; lipopoly-saccharides (LPS) - by electrophoresis in polyacrylamide gel in the presence of sodium dodecylsulfate (SDS-PAGE). Results. Survival rate of bacteria is dependent on phenol concentration, biocide treatment time and parameters ofcell cultivation. Addition of glucose or galactose into the nutrient medium increases the resistance of Yersinia against phenol. Bacterial cultures are heterogeneous in the resistance against phenol independently of the production parameters. Phenol causes damage in outer bacterial membrane, as evidenced by accumulation of lysophos-phatidylethanolamine in the cell, the main product of enzyme activity of membrane-bound phospholipase A, and release into the cultural medium of part of LPS. Treatment by phenol in bactericidal concentration is accompanied by changes in phospholipidic and fatty acid composition of bacterial cell envelope. Conclusion. New data are obtained on environmental factors that contribute to the increase of resistance of bacteria against phenolic biocides.
Цель. Изучение бактерицидного действия фенола на Yersinia pseudotuberculosis, выращенные на различных питательных средах. Материалы и методы. Бактерии выращивали на питательном бульоне (ПБ) и ПБ с добавлением глюкозы (ПБ+Гл) или галактозы (ПБ+Гал) при 8°С. Действие фенола на бактерии оценивали по изменению оптической плотности суспензий и численности жизнеспособных клеток, а также по окрашиванию клеток бромистым этидием. Липиды анализировали с помощью тонкослойной и газожидкостной хроматографии, газожидкостной хроматографии - масс-спектрометрии, дифференциальной сканирующей калориметрии; липополисахариды (ЛПС) - с помощью электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (ДСН-ПААГ). Результаты. Показано, что выживаемость бактерий зависит от концентрации фенола, времени обработки биоцидом и условий культивирования клеток. Добавление в питательную среду глюкозы или галактозы увеличивает устойчивость иерсиний к фенолу. Бактериальные культуры независимо от условий выращивания гетерогенны по устойчивости клеток к фенолу. Фенол вызывает повреждения в наружной мембране бактерий, о чем свидетельствует накопление в клетке лизофосфатидил-этаноламина, основного продукта ферментативной активности мембраносвязанной фосфолипазы А, и высвобождение в культуральную среду части ЛПС. Обработка фенолом в бактерицидной концентрации сопровождается изменением фосфолипидного и жирнокислотного состава клеточной оболочки бактерий. Заключение. Получены новые данные о факторах внешней среды, способствующих повышению устойчивости бактерий к фенольным биоцидам.