Aim. Development a method of treatment of Streptococcus pyogenes bacteria that does not disrupt the integrity of surface structure of cell and provides optimal reproducibility of enzyme preparation activity test results. Materials and methods. Museum cultures of S.pyogenes M29 and S.pyogenes T1 were used, as well as standard strain S.pyogenes T5 (ATCC) and 3 phage-associated lysine PlyC preparations (enzybiotics): 2 isolated from phage C1, third - recombinant enzyme obtained by cloning phage C1 DNA. 3 methods of S.pyogenes cells treatment were used: inactivation by chloroform, antibiotics and heating. Results. Treatment of S.pyogenes cells by rifampicin and gentamicin allows simultaneous turbidimetric determination of enzyme preparations activity and streptococci lysis effectiveness with a good reproducibility of test results. Comparison of kinetic curves of streptococci lysis killed by heating with curves of live culture lysis showed that heat treatment of cells results in a decrease of lysis depth and a reduction of enzyme activity. Pattern and effectiveness of lysis of cells incubated with chloroform approached curve of live streptococci lysis, however this method did not exclude lysis of part of cells and required presence of equipment for work with chemical substances. Conclusion. S.pyogenes test culture inactivation method by 2-step treatment of culture with antibiotics that does not disrupt the integrity of surface structure of cells and provides optimal reproducibility of enzyme preparation activity test results was developed.
Цель. Разработать метод обработки бактерий Streptococcus pyogenes, не нарушающий целостность поверхностной структуры клеток, обеспечивающий оптимальную воспроизводимость результатов испытаний активности ферментных препаратов. Материалы и методы. В работе использовали музейные культуры S. pyogenes M29 и S. pyogenes T1, эталонный штамм S. pyogenes T5 (ATCC) и 3 препарата фаг-ассоциированного лизина (энзибиотика) PlyC: два выделены из фага С1, третий - рекомбинантный фермент, полученный клонированием ДНК фага С1. Применяли 3 способа обработки клеток S. pyogenes: инактивацию хлороформом, антибиотиками и прогреванием. Результаты. Установлено, что обработка клеток S. pyogenes рифампи-цином и гентамицином позволяет проводить одновременное турбидиметрическое определение активности ферментных препаратов и эффективности лизиса стрептококков с хорошим воспроизведением результатов испытаний. Сравнение кинетических кривых лизиса стрептококков, убитых нагреванием, с кривыми лизиса живых культур показало, что термическая обработка клеток приводит к уменьшению глубины лизиса и снижению активности фермента. Характер и эффективность лизиса клеток, проинкубированных с хлороформом, приближались к кривой лизиса живых стрептококков, однако метод не исключал лизиса части клеток и требовал наличия оборудования для работы с химическими веществами. Заключение. Разработан метод инактивации тест-культуры S. pyogenes путем двуступенчатой обработки культуры антибиотиками, не нарушающий целостность поверхностной структуры клеток, обеспечивающий оптимальную воспроизводимость результатов испытаний активности ферментных препаратов.