Journal of microbiology, epidemiology and immunobiologyJournal of microbiology, epidemiology and immunobiologyЖурнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии0372-93112686-7613Central Research Institute for Epidemiology13527ArticlesСтатьиShort CommunicationUSE OF PLANT-ORIGIN COMPONENTS IN ROLLER CULTIVATION OF VACCINE REASSORTANT INFLUENZA VIRUS STRAIN H5N2ИСПОЛЬЗОВАНИЕ РАСТИТЕЛЬНЫХ КОМПОНЕНТОВ В РОЛЛЕРНОМ КУЛЬТИВИРОВАНИИ ВАКЦИННОГО РЕАССОРТАНТНОГО ШТАММА ВИРУСА ГРИППА H5N2MazurkovaN. AМазурковаН. АDeshevaYu. AДешеваЮ. АShishkinaL. NШишкинаЛ. НStavskyE. AСтавскийЕ. АRudenkoL. GРуденкоЛ. ГState Scientific Center of Virology and Biotechnology «Vector», Koltsovo, Novosibirsk regionГНЦ вирусологии и биотехнологии «Вектор», пос. Кольцово, Новосибирская облResearch Institute of Experimental Medicine, St. Petersburg, RussiaНИИ экспериментальной медицины, Санкт-Петербург15042011882NO2 (2011)№2 (2011)889209062023Copyright ©; 2011, Mazurkova N.A., Desheva Y.A., Shishkina L.N., Stavsky E.A., Rudenko L.G.Copyright ©; 2011, Мазуркова Н.А., Дешева Ю.А., Шишкина Л.Н., Ставский Е.А., Руденко Л.Г.2011Mazurkova N.A., Desheva Y.A., Shishkina L.N., Stavsky E.A., Rudenko L.G.Мазуркова Н.А., Дешева Ю.А., Шишкина Л.Н., Ставский Е.А., Руденко Л.Г.https://creativecommons.org/licenses/by/4.0https://microbiol.crie.ru/jour/article/view/13527

Aim. To study the optimal conditions for roller cultivation of cold-adapted reassortant vaccine strain of influenza virus A/17/Duck/ Potsdam/86/92 (H5N2) in MDCK and Vero cell cultures grown on nutrient medium based on soy and rice flour hydrolysates obtained using trypsin and bromeline. Materials and methods. Vaccine strain was cultivated on MDCK and Vero cells in rollers in the presence of plant proteases. Obtained culture samples of vaccine strains were lyophilized and their infectivity was assessed. Results. Cultivation of vaccine strain on MDCK and Vero cells grown in experimental media containing reduced quantity (2 and 3% respectively) of fetal calf serum («Gibco», USA) resulted in high titers of the virus in the presence of plant proteases (4 mcg/ml of papain and 20 mcg/ml bromeline). Conclusion. Use of plant enzymes and nutrient media based on enzymic plant hydrolysates, including those obtained with bromeline, for cultivation of vaccine strain on MDCK and Vero cell cultures in rollers could make the manufacturing process of live influenza vaccines safer and more cost effective.

Цель. Изучение оптимальных условий роллерного культивирования холодоадаптированного реассортантного вакцинного штамма вируса гриппа А/17/Утка/Потсдам/86/92 (H5N2) в культурах клеток MDCK и Vero, выращенных в питательных средах на основе ферментативных гидролизатов соевой и рисовой муки, полученных с помощью трипсина и бромелайна. Материалы и методы. Вакцинный штамм культивировали в роллерах в присутствии растительных протеаз на клетках MDCK и Vero, выращенных в питательных средах на основе растительных гидролизатов. Полученные культуральные образцы вакцинного штамма лиофильно высушивали и оценивали сохранение их инфекционности. Результаты. При культивировании вакцинного штамма в культурах клеток MDCK и Vero, выращенных в экспериментальных средах, содержащих сниженное количество (2 и 3%) сыворотки крови плодов коровы («Gibco», США) соответственно, обнаружены высокие титры в присутствии растительных протеаз: 4 мкг/мл папаина и 20 мкг/мл бромелайна. Заключение. Использование растительных ферментов и питательных сред на основе ферментативных растительных гидролизатов, в том числе полученных с помощью бромелайна, для культивирования вакцинного штамма на культурах клеток MDCK и Vero в роллерах могут сделать производство гриппозных вакцин более безопасным и экономичным.

influenza viruslive cell culture vaccineMDCK and Vero cellsrollersoy and rice flour hydrolysatebromelinepapainвирус гриппаживая культуральная вакцинаклетки MDCK и Veroроллергидролизат соевой и рисовой мукибромелайнпапаинДешева Ю.А., Руденко Л.Г., Александрова Г.И. Штамм вируса гриппа А/17/утка/ Потсдам/86/92(Н5N2) для производства живой и инактивированной гриппозной вакцины. Патент РФ № 2318871, 2008.Инструкция по проведению работ с целью определения сроков годности лекарственных средств на основе метода «ускоренного старения» при повышенной температуре. И-42-2-82. М., 1983.Мазуркова Н.А., Дешева Ю.А., Руденко Л.Г. и др. Репродукция холодоадаптированного вакцинного штамма вируса гриппа H5N2 в клеточных культурах MDCK и Vero при использовании растительных протеаз и питательных сред на основе гидролизатов рисовой и соевой муки. Биотехнология. 2010, 1: 68-76.Онищенко Г.Г., Сергеев А.Н., Скарнович М.О. и др. Адссорбционно-криогенный аппарат для сублимационного высушивания биологических материалов. Патент № 55949, 2006.Трошкова Г.П., Сумкина Т.П., Мазуркова Н.А. и др. Питательная среда для культивирования клеток млекопитающих. Патент РФ № 2377295, 2009.Трошкова Г.П., Мазуркова Н.А., Сумкина Т.П. и др. Технология получения гидролизата сои с использованием протеолитического фермента бромелайна и оценка ростовых свойств питательной среды на его основе для перевиваемых культур клеток. Совр. наукоемкие техн. 2010, 1: 45-47.Телишевская Л.Я. Белковые гидролизаты. Получение, состав, применение. М., 2000.Genzel Y., Olmer R.M., Schafer B. et al. Wave microcarrier cultivation of MDCK cells for influenza virus production in serum containing and serum-free media. Vaccine. 2006, 24: 6074-6087.Montagnon B., Vincent-Falquet J.C., Fanget B. Thousand litre scale microcarrier culture of Vero cells for killed virus vaccine promising results. Dev. Biol. Stand. 1984, 55: 37-42.Rudenko L.G. Options for the control of influenza VI. J.M. Katz (ed.). London, Atlanta, Int. Med. Press. 2008, p. 122-124.