Journal of microbiology, epidemiology and immunobiologyJournal of microbiology, epidemiology and immunobiologyЖурнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии0372-93112686-7613Central Research Institute for Epidemiology13484ArticlesСтатьиResearch ArticleUSE OF pH-SENSITIVE IMMOBILIZED MONOCLONAL ANTIBODIES FOR OPTIMIZATION OF IMMUNOENZYME SANDWICH TECHNIQUE OF DETECTION OF HBsAg OF HEPATITIS B VIRUSИСПОЛЬЗОВАНИЕ рН-ЧУВСТВИТЕЛЬНЫХ ИММОБИЛИЗОВАННЫХ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ ДЛЯ ОПТИМИЗАЦИИ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО СЭНДВИЧ-МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ HBsAg ВИРУСА ГЕПАТИТА ВYakovlevaD. AЯковлеваД. АDmitrievA. DДмитриевА. ДDmitrievD. AДмитриевД. АKolyaskinaG. IКоляскинаГ. ИMassinoYu. SМассиноЮ. СPavlovaE. VПавловаЕ. ВPyrenkovaI. YuПыренковаИ. ЮSmirnovaM. BСмирноваМ. БSegalO. LСегалО. ЛTarakanovaYu. NТаракановаЮ. НUlanovaT. IУлановаТ. ИFartushnayaO. NФартушнаяО. НSharipovaI. NШариповаИ. НKolyaskinaG. IКоляскинаГ. ИLavrovV. FЛавровВ. ФScientific Center for Mental HealthНаучный центр психического здоровья РАМНInstitute of Higher Nervious Activity and Neurophysiology, Moscow,RussiaИнститут высшей нервной деятельности и нейрофизиологии, МоскваScientific-Manufacturing Organization «Diagnostic Systems», Nizhny NovgorogНПО «Диагностические системы», Нижний НовгороScientific-Manufacturing Organization «Diagnostic Systems», Nizhny NovgorogMechnikov Research Institute of Vaccines and Sera, Moscow, RussiaНИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова, Москва15042010872NO2 (2010)№2 (2010)858909062023Copyright ©; 2010, Yakovleva D.A., Dmitriev A.D., Dmitriev D.A., Kolyaskina G.I., Massino Y.S., Pavlova E.V., Pyrenkova I.Y., Smirnova M.B., Segal O.L., Tarakanova Y.N., Ulanova T.I., Fartushnaya O.N., Sharipova I.N., Kolyaskina G.I., Lavrov V.F.Copyright ©; 2010, Яковлева Д.А., Дмитриев А.Д., Дмитриев Д.А., Коляскина Г.И., Массино Ю.С., Павлова Е.В., Пыренкова И.Ю., Смирнова М.Б., Сегал О.Л., Тараканова Ю.Н., Уланова Т.И., Фартушная О.Н., Шарипова И.Н., Коляскина Г.И., Лавров В.Ф.2010Yakovleva D.A., Dmitriev A.D., Dmitriev D.A., Kolyaskina G.I., Massino Y.S., Pavlova E.V., Pyrenkova I.Y., Smirnova M.B., Segal O.L., Tarakanova Y.N., Ulanova T.I., Fartushnaya O.N., Sharipova I.N., Kolyaskina G.I., Lavrov V.F.Яковлева Д.А., Дмитриев А.Д., Дмитриев Д.А., Коляскина Г.И., Массино Ю.С., Павлова Е.В., Пыренкова И.Ю., Смирнова М.Б., Сегал О.Л., Тараканова Ю.Н., Уланова Т.И., Фартушная О.Н., Шарипова И.Н., Коляскина Г.И., Лавров В.Ф.https://creativecommons.org/licenses/by/4.0https://microbiol.crie.ru/jour/article/view/13484

Aim. To develop highly sensitive sandwich technique for identification of surface hepatitis B virus antigen (HBsAg) in serum and analyse of possible improvement of solid phase for immunoenzyme sandwich technique of HBsAg identification through variation of pH-dependent sorption of monoclonal antibodies on the surface of immune plates. Materials and methods. Calibration curves for identification of HBsAg in sandwich techniques using 36 possible binary combinations of monoclonal antibodies of our panel (including high affinity antibodies to HBsAg produced by 6 hybridomas) were compared. Immobilization of antibodies on solid phase (by passive sorption) was performed at different pH values (2.8, 7.5, and 9.5). Results. Analysis of panel of antibodies to HBsAg produced by 6 hybridomas revealed pH-dependent monoclonal antibodies (18C8), which immobilization at low pH values together with detecting antibodies F4F3 allowed to greatly improve sensitivity of the sandwich technique. Minimal credibly detectable concentration of HBsAg in sera of persons infected with hepatitis B virus was 0.013—0.017 ng/ml. Validation of sandwich technique was performed on sertified panel of serum samples with various concentrations of HBsAg (different serotypes). Conclusion. Highly sensitive sandwich technique for detection of HBsAg was developed. It was shown that analysis of panel of monoclonal antibodies on pH-dependence could be used as simple methodical approach for optimization of immunoenzyme sandwich techniques for detection of different antigens.

Цель. Получение высокочувствительного сэндвич-метода определения поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg) в сыворотке крови. Анализ возможности оптимизации твердой фазы в иммуноферментом сэндвич методе определения HВsAg путем вариации рН сорбции моноклональных антител на поверхность иммунных планшетов. Материалы и методы. Сравнивали калибровочные кривые для определения HВsAg в сэндвич-методах, использующих 36 возможных парных сочетаний моноклональных антител нашей панели (включающей высокоаффинные антитела к HBsAg, продуцируемые шестью гибридомами). Иммобилизацию антител на твердой фазе (путем пассивной сорбции) проводили при различных значениях рН (2,8; 7,5 и 9,5). Результаты. Анализ панели антител из 6 гибридом к HВsAg выявил рН-чувствительные моноклональные антитела (18С8), иммобилизация которых при низких значениях рН (2,8) с детектирующими антителами F4F3 позволила резко увеличить чувствительность сэндвич-метода. Минимальная достоверно определяемая концентрация HBsAg в сыворотках больных, инфицированных вирусом гепатита В, составляла 0,013—0,017 нг/мл. Валидация сэндвич-метода была проведена на сертифицированной панели сывороток с различными концентрациями HBsAg (разных серотипов). Заключение. Сконструирован высокочувствительный сэндвич-метод определения HВsAg. Показано, что анализ панели моноклональных антител на рН-чувствительность может использоваться в качестве простого методического приема для оптимизации иммуноферментных сэндвич-методов определения различных антигенов.

monoclonal antibodiesimmunoenzyme sandwich techniquesurface hepatitis B virus antigen (HBsAg)blood serumмоноклональные антителаиммуноферментный сэндвич-методповерхностный антиген вируса ГВ (HBsAg)сыворотка кровиBlock T.M., Guo H., Guo J.T. Molecular virology of hepatitis B virus for clinicans. Clin. Liver. Dis. 2007, 11 (4): 685-706.Butler J.E. Solid supports in enzyme linked immunosorbent assays and other solid phase immunoassays. Methods Mol. Med. 2004, 94: 333-372.Butler J.E., Ni L., Joschi K.S. et al. The physical and functional behavior of capture antibodies adsorbed on polysterene. J. Immunol. Meth. 1992, 150 (1—2): 77-90.Comanor L., Holland P. Hepatitis B virus blood screening: unfinished agendas. Vox Sang. 2006, 91 (1): 1-12.Dmitriev A.D., Factor M.I., Segal O.L. et al. Western blot analysis of human and rat serotonin transporter in platelets and brain using site-specific antibodies: Evidence that transporter undergoes endoproteolytic cleavage. Clin. Chim. Acta. 2005, 356 (1—2): 76-94.Klonish T., Panayotou G., Edwards P. et al. Enhancement in antigen binding by a combination of synergy and antibody capture. Immunology. 1996, 89 (2): 165-171.Nikulina V.A., Kizim E.A., Massino Y.S. et al. Synergistic effects in antigen capturer ELISA using three monoclonal antibodies directed at different epitopes of the same antigen. Clin. Chim. Acta. 2000, 299 (1—2): 25-44.Valimaa L., Laurikainen K. Comparison of streptavidin-coated microtitration plates. J. Immunol. Meth. 2006, 308 (1—2): 203-215.