Journal of microbiology, epidemiology and immunobiologyJournal of microbiology, epidemiology and immunobiologyЖурнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии0372-93112686-7613Central Research Institute for Epidemiology13299ArticlesСтатьиResearch ArticleINFLUENCE OF DIFFERENT DETOXIFYING AGENTS ON TOXIC CHARACTERISTICS OF HAEMOPHILUS INFLUENZAE LYPOOLIGOSACCHARIDESВЛИЯНИЕ РАЗЛИЧНЫХ ДЕТОКСИЦИРУЮЩИХ РЕАГЕНТОВ НА ТОКСИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ЛИПООЛИГОСАХАРИДОВ HAEMOPHILUS INFLUENZAENovikovaO. AНовиковаО. АVaneevaN. PВанееваН. ПElkinaS. IЕлкинаС. ИKalinaN. GКалинаН. ГTokarskayaM. MТокарскаяМ. МYastrebovaN. EЯстребоваН. ЕOrlovaO. EОрловаО. ЕMechnikov Research Institute of Vaccines and Sera, Moscow, RussiaНИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова, Москва15102009865NO5 (2009)№5 (2009)434609062023Copyright ©; 2009, Novikova O.A., Vaneeva N.P., Elkina S.I., Kalina N.G., Tokarskaya M.M., Yastrebova N.E., Orlova O.E.Copyright ©; 2009, Новикова О.А., Ванеева Н.П., Елкина С.И., Калина Н.Г., Токарская М.М., Ястребова Н.Е., Орлова О.Е.2009Novikova O.A., Vaneeva N.P., Elkina S.I., Kalina N.G., Tokarskaya M.M., Yastrebova N.E., Orlova O.E.Новикова О.А., Ванеева Н.П., Елкина С.И., Калина Н.Г., Токарская М.М., Ястребова Н.Е., Орлова О.Е.https://creativecommons.org/licenses/by/4.0https://microbiol.crie.ru/jour/article/view/13299

Aim. To study toxicity of lypooligosaccharides (LOS) of non-typable Haemophilus influenzae (NTHi) strain and products of their detoxication obtained using different reagents. Materials and methods. LPS was obtained from the NTHi strain grown on solid brain-heart infusion nutrient medium using previously described method of isolation and purification of LOS. Obtained LPS was treated in same conditions by one of the 3 detoxifying agents: anhydrous hydrazine (AH), alkali (NaOH), and hydrochloric hydroxylamine (HH). Toxicity of LOS and its detoxified derivatives was measured on outbred mice which were administered 0.5 ml of actinomycin D intraperitoneally 1 day before immunization. Death of animals was assessed on day 2 after immunization. Polyacrylamide gel electrophoresis was used for study the influence of detoxifying agents on physico-chemical properties of LOS. Results. As a result of treatment of NTHi No.45 LOS by different detoxifying agents, 3 preparations of detoxified LOS (d-LOS) and 3 preparations from precipitates (nd-LOS) were obtained. Preparation d-LOS AH was the least toxic. Toxic properties of nd-LOS HH did not reliably change. PAAG electrophoresis showed that virtually all detoxified preparations were characterized by higher migration of lypooligosaccharide components compared to original LOS of NTHi No. 45, which indicates the lowering of LOS molecular weight after treatment by detoxifying agents, associated with elimination of lipid A higher fatty acids. Conclusion. Analysis of effects of detoxifying agents indicates the need to select individual conditions for treatment by each of them.

Цель . Изучить токсичность липоолигосахаридов (ЛОС) одного из нетипируемых штаммов Haemophilus influenzae (NTHi) и продуктов его детоксикации, полученных с использованием различных реагентов. Материалы и методы. ЛОС получали из нетипируемого штамма H.influenzae, выращенного на плотной сердечномозговой питательной среде, с помощью описанной ранее методики выделения и очистки ЛПС. Полученный препарат ЛОС подвергали действию трех детоксицирующих агентов: безводного гидрозина (БГ), щелочи (NaOH) и солянокислого гидроксиламина (ГА) в одинаковых условиях. Токсичность ЛОС и его детоксицированных производных определяли на беспородных мышах, которым за день до иммунизации внутрибрюшинно вводили по 0,5 мл актиномицина Д. Гибель животных учитывали на 2 сутки после иммунизации. Для изучения влияния детоксицирующих агентов на физико-химические свойства ЛОС использовали электрофорез в полиакриламидном геле. Результаты . В результате обработки ЛОС NTHi № 45 различными детоксицирующими агентами были получены три препарата детоксицированных ЛОС (д-ЛОС) и три из осадков (нд-ЛОС). Наименее токсичным оказался препарат д-ЛОС БГ. Достоверно не изменились токсические свойства препарата ндЛОС Г А. В электрофорезе в ПААГ практически все детоксицированные препараты показали более быструю миграцию липоолигосахаридных ком- понентов, по сравнению с исходным препаратом ЛОС NTHi № 45, что указывает на уменьшение молекулярного веса ЛОС после обработки их детоксицирующими агентами, связанное с удалением высших жирных кислот липида А. Заключение . Анализ результатов действия детоксицирующих агентов указывает на необходимость подбора индивидуальных условий для воздействия каждого из них.

lypooligosaccharidesnon-typable strains of H.influenzaetoxicitydetoxifying agentsлипоолигосахаридынетипируемые штаммы H.influenzaeтоксичностьдетоксицирующие агентыБрикун И.К., Козловский М.Т., Никитина Л.В. Гидразин и гидроксиламин и их применение в аналитической химии. А.-Д., 1967.Варбанец Л.Д., Здоровенко Г.М., Книрель Ю.А. Методы исследования эндотоксинов. Киев, Наукова думка, 2006.Захарова Н.Е. Определение влияния гидроксиламингидрохлорида на состав и свойства антигенов Shigella dysenteriae 1. Автореф. дис. канд. мед. наук. М., 2001.Foxwell A.R., Kyd J.M., Cripps A.W. Nontypeable Haemophilus influenzae: Pathogenesis and prevention. Microbiol. Mol. Biol. Rev. 1998, 62 (2):294–308.Gu X.X., Sun J., Jin S. et al. Detoxified lipooligosaccaride from nontypeable Haemophilus influenzae conjugated to proteins confers protection against otitis media in chinchillas. Infect. Immun. 1997, 65 (11): 4488–4493.Gu X.X., Tsai C.M., Ueyama T. et al. Synthesis, characterization, and immunologic properties of detoxified lipooligosaccharide from non-typeable Haemophilus influenzae conjugated to proteins. Ibid. 2001, 69 (4): 2636–2642.Laemmli U. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 1970, 227: 680–685.Pieroni R.B., Broderich E.J., Bundeally A., Leovine L. A simple method for the quentitation of submicrogram amounts of bacterial endotoxin. Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1970, 133 (3): 790-794.Rahman M.M., Gu X.X., Tsai C.M. et al. Structural heterogeneity of the lipooligosaccharide (LOS) expressed by pathogenic non-typeable Haemophilus influenzae strain NTHi 9274. Glycobiology. 1999, 9 (12): 1371–1380.Westphal O., Jann K. Bacterial lipopolysaccharides. Extraction with phenol-water and further applications of the procedure. Meth. Carbohyd. Chem. 1965, 5: 83-91.